热带作物学报
熱帶作物學報
열대작물학보
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS
2013年
10期
1941-1946
,共6页
张冲%曾建斌%陈华%姜宝杰%贺小彦%庄伟建
張遲%曾建斌%陳華%薑寶傑%賀小彥%莊偉建
장충%증건빈%진화%강보걸%하소언%장위건
花生%青枯病%SMART技术%cDNA文库
花生%青枯病%SMART技術%cDNA文庫
화생%청고병%SMART기술%cDNA문고
Peanut%Bacterial wilt (Ralstonia solanacearum)%SMART system%cDNA libraty
以优质抗青枯病花生品种闽花8号为材料,在苗期利用灌根法接种花生青枯菌,分不同时期取根,利用改良的CTAB-LiCl法提取接种和非接种的混合RNA,采用SMART(Switching Mechanism At 5'end of RNATranscript)技术合成双链cDNA,经SfiⅠ酶切后胶回收纯化双链cDNA,连接到质粒载体pDNR-LIB上,电击转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,成功构建了青枯菌诱导的处理和对照混合全长cDNA文库.经鉴定,初级文库库容为1.78×10 cfu/mL,重组率达到99％以上,插入片段集中在750～2 500 bp之间,平均长度约为1 300 bp,经扩增后的文库滴度为2.97×109 cfu/mL.随机挑取部分克隆测序,利用生物信息学软件进行初步分析获得一些EST数据.说明得到了高质量的全长cDNA文库,这为筛选和克隆青枯菌诱导的胁迫相关基因提供了资源基础.
以優質抗青枯病花生品種閩花8號為材料,在苗期利用灌根法接種花生青枯菌,分不同時期取根,利用改良的CTAB-LiCl法提取接種和非接種的混閤RNA,採用SMART(Switching Mechanism At 5'end of RNATranscript)技術閤成雙鏈cDNA,經SfiⅠ酶切後膠迴收純化雙鏈cDNA,連接到質粒載體pDNR-LIB上,電擊轉化大腸桿菌DH5α感受態細胞,成功構建瞭青枯菌誘導的處理和對照混閤全長cDNA文庫.經鑒定,初級文庫庫容為1.78×10 cfu/mL,重組率達到99％以上,插入片段集中在750～2 500 bp之間,平均長度約為1 300 bp,經擴增後的文庫滴度為2.97×109 cfu/mL.隨機挑取部分剋隆測序,利用生物信息學軟件進行初步分析穫得一些EST數據.說明得到瞭高質量的全長cDNA文庫,這為篩選和剋隆青枯菌誘導的脅迫相關基因提供瞭資源基礎.
이우질항청고병화생품충민화8호위재료,재묘기이용관근법접충화생청고균,분불동시기취근,이용개량적CTAB-LiCl법제취접충화비접충적혼합RNA,채용SMART(Switching Mechanism At 5'end of RNATranscript)기술합성쌍련cDNA,경SfiⅠ매절후효회수순화쌍련cDNA,련접도질립재체pDNR-LIB상,전격전화대장간균DH5α감수태세포,성공구건료청고균유도적처리화대조혼합전장cDNA문고.경감정,초급문고고용위1.78×10 cfu/mL,중조솔체도99％이상,삽입편단집중재750～2 500 bp지간,평균장도약위1 300 bp,경확증후적문고적도위2.97×109 cfu/mL.수궤도취부분극륭측서,이용생물신식학연건진행초보분석획득일사EST수거.설명득도료고질량적전장cDNA문고,저위사선화극륭청고균유도적협박상관기인제공료자원기출.
