热带作物学报
熱帶作物學報
열대작물학보
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS
2013年
10期
1902-1906
,共5页
何鑫%吴绍华%邓顺楠%陈月异%田维敏
何鑫%吳紹華%鄧順楠%陳月異%田維敏
하흠%오소화%산순남%진월이%전유민
巴西橡胶树%HbJAZ3%原核表达%定点突变技术%蛋白纯化
巴西橡膠樹%HbJAZ3%原覈錶達%定點突變技術%蛋白純化
파서상효수%HbJAZ3%원핵표체%정점돌변기술%단백순화
Hevea brasiliensis%HbJAZ3%Prokaryotic expression%Site-directed mutagenesis%Protein purification
植物JAZ蛋白是茉莉酸信号调控途径的关键环节之一.HbJAZ3基因是橡胶树乳管细胞中编码JAZ蛋白的基因家族成员之一.本文采用原核表达和定点突变技术,构建了pET28a(+)-JAZ3、pET28a(+)-JAZ3-ZIM-mut(缺失ZIM结构域中TIFY基序)和pET28a(+)-JAZ3-Jas-mut(缺失Jas结构域的保守氨基酸FLEKRK)的His标签融合蛋白表达载体,并成功转化大肠杆菌Rosetta(DE3).在37℃条件下,用1 mmol/L IPTG诱导2h能够诱导目的蛋白以包涵体的形式大量表达.通过镍柱纯化了目的蛋白,获得了HbJAZ3及其ZIM结构域和Jas结构域的突变体蛋白,为进步一鉴定乳管细胞茉莉酸信号途径的关键环节打下了良好基础.
植物JAZ蛋白是茉莉痠信號調控途徑的關鍵環節之一.HbJAZ3基因是橡膠樹乳管細胞中編碼JAZ蛋白的基因傢族成員之一.本文採用原覈錶達和定點突變技術,構建瞭pET28a(+)-JAZ3、pET28a(+)-JAZ3-ZIM-mut(缺失ZIM結構域中TIFY基序)和pET28a(+)-JAZ3-Jas-mut(缺失Jas結構域的保守氨基痠FLEKRK)的His標籤融閤蛋白錶達載體,併成功轉化大腸桿菌Rosetta(DE3).在37℃條件下,用1 mmol/L IPTG誘導2h能夠誘導目的蛋白以包涵體的形式大量錶達.通過鎳柱純化瞭目的蛋白,穫得瞭HbJAZ3及其ZIM結構域和Jas結構域的突變體蛋白,為進步一鑒定乳管細胞茉莉痠信號途徑的關鍵環節打下瞭良好基礎.
식물JAZ단백시말리산신호조공도경적관건배절지일.HbJAZ3기인시상효수유관세포중편마JAZ단백적기인가족성원지일.본문채용원핵표체화정점돌변기술,구건료pET28a(+)-JAZ3、pET28a(+)-JAZ3-ZIM-mut(결실ZIM결구역중TIFY기서)화pET28a(+)-JAZ3-Jas-mut(결실Jas결구역적보수안기산FLEKRK)적His표첨융합단백표체재체,병성공전화대장간균Rosetta(DE3).재37℃조건하,용1 mmol/L IPTG유도2h능구유도목적단백이포함체적형식대량표체.통과얼주순화료목적단백,획득료HbJAZ3급기ZIM결구역화Jas결구역적돌변체단백,위진보일감정유관세포말리산신호도경적관건배절타하료량호기출.
