西南国防医药
西南國防醫藥
서남국방의약
MEDICAL JOURNAL OF NATIONAL DEFENDING FORCES IN SOUTHWEST CHINA
2014年
1期
6-9
,共4页
王国威%王宗华%王仙园%范亚川%邹利全%李学成%陈陵
王國威%王宗華%王仙園%範亞川%鄒利全%李學成%陳陵
왕국위%왕종화%왕선완%범아천%추리전%리학성%진릉
微RNAs%血管内皮生长因子%miR-29a%胃癌
微RNAs%血管內皮生長因子%miR-29a%胃癌
미RNAs%혈관내피생장인자%miR-29a%위암
目的 验证胃癌细胞株SGC-7901内miR-29a对靶基因VEGF-A的直接调控作用.方法 采用负载miR-29a的腺病毒载体(Ad-miR29a)感染人胃癌细胞株SGC-7901,上调SGC-7901细胞内miR-29a的表达丰度后,采用RT-qPCR及Western blot法分别检测SGC-7901细胞内VEGF-A在mRNA及蛋白水平的表达;进一步采用双荧光素酶实验及突变实验,验证miR-29a是否通过结合在VEGF-A 3'UTR而直接抑制靶基因表达.结果 与感染阴性对照Ad-LacZ的SGC-7901细胞相比,感染Ad-miR29a的SGC-7901细胞内VEGF-A蛋白表达下降(0.42±0.02 vs.0.91±0.03,P＜0.01),且VEGF-A mRNA水平亦下调(0.75±0.21 vs.1.15±0.25,P＜0.05);荧光素酶实验显示,与阴性对照相比,转染miR-29a mimic后,HEK293细胞萤火虫荧光素酶活性明显下降(0.56±0.13 vs.0.93±0.06,P＜0.05);而在VEGF-A 3'UTR与miR-29a的结合位点被突变之后,HEK293细胞萤火虫荧光素酶活性得以恢复.结论 miR-29a通过结合于VEGF-A 3'UTR相应位点,直接抑制VEGF-A在mRNA及蛋白水平的表达.miR-29a可能成为胃癌基因治疗的有效靶标.
目的 驗證胃癌細胞株SGC-7901內miR-29a對靶基因VEGF-A的直接調控作用.方法 採用負載miR-29a的腺病毒載體(Ad-miR29a)感染人胃癌細胞株SGC-7901,上調SGC-7901細胞內miR-29a的錶達豐度後,採用RT-qPCR及Western blot法分彆檢測SGC-7901細胞內VEGF-A在mRNA及蛋白水平的錶達;進一步採用雙熒光素酶實驗及突變實驗,驗證miR-29a是否通過結閤在VEGF-A 3'UTR而直接抑製靶基因錶達.結果 與感染陰性對照Ad-LacZ的SGC-7901細胞相比,感染Ad-miR29a的SGC-7901細胞內VEGF-A蛋白錶達下降(0.42±0.02 vs.0.91±0.03,P＜0.01),且VEGF-A mRNA水平亦下調(0.75±0.21 vs.1.15±0.25,P＜0.05);熒光素酶實驗顯示,與陰性對照相比,轉染miR-29a mimic後,HEK293細胞螢火蟲熒光素酶活性明顯下降(0.56±0.13 vs.0.93±0.06,P＜0.05);而在VEGF-A 3'UTR與miR-29a的結閤位點被突變之後,HEK293細胞螢火蟲熒光素酶活性得以恢複.結論 miR-29a通過結閤于VEGF-A 3'UTR相應位點,直接抑製VEGF-A在mRNA及蛋白水平的錶達.miR-29a可能成為胃癌基因治療的有效靶標.
목적 험증위암세포주SGC-7901내miR-29a대파기인VEGF-A적직접조공작용.방법 채용부재miR-29a적선병독재체(Ad-miR29a)감염인위암세포주SGC-7901,상조SGC-7901세포내miR-29a적표체봉도후,채용RT-qPCR급Western blot법분별검측SGC-7901세포내VEGF-A재mRNA급단백수평적표체;진일보채용쌍형광소매실험급돌변실험,험증miR-29a시부통과결합재VEGF-A 3'UTR이직접억제파기인표체.결과 여감염음성대조Ad-LacZ적SGC-7901세포상비,감염Ad-miR29a적SGC-7901세포내VEGF-A단백표체하강(0.42±0.02 vs.0.91±0.03,P＜0.01),차VEGF-A mRNA수평역하조(0.75±0.21 vs.1.15±0.25,P＜0.05);형광소매실험현시,여음성대조상비,전염miR-29a mimic후,HEK293세포형화충형광소매활성명현하강(0.56±0.13 vs.0.93±0.06,P＜0.05);이재VEGF-A 3'UTR여miR-29a적결합위점피돌변지후,HEK293세포형화충형광소매활성득이회복.결론 miR-29a통과결합우VEGF-A 3'UTR상응위점,직접억제VEGF-A재mRNA급단백수평적표체.miR-29a가능성위위암기인치료적유효파표.
