CAJ | 학술논문

运用蛋白质组学及免疫学技术筛选和鉴定副溶血弧菌的外膜蛋白中具有较好免疫原性的外膜蛋白,为防治副溶血孤菌类疾病的亚单位疫苗的研发奠定基础.用灭活的副溶血弧菌免疫ICR小鼠制备抗血清;通过对外膜蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot分析筛选免疫原性蛋白,经MALDI-TOF/TOF-MS质谱分析,对免疫原性蛋白进行鉴定.克隆表达免疫原性蛋白VP0802,并对该蛋白的表达条件进行优化,最后纯化蛋白VP0802,并免疫小鼠获得抗血清,通过Western Blot验证蛋白VP0802的免疫原性.结果:免疫小鼠所得到的抗血清效价为1:5 000;经免疫印迹分析确定了12种外膜蛋白具有较好免疫原性,其中10种外膜蛋白经质谱分析得到鉴定,分别为LPS-assembly protein,VP0802,Maltoporin,Chitoporin,OmpC,OmpA,OmpU,OmpK,VP1243和VP0966.成功构建免疫原性蛋白VP0802的高表达菌株;该菌株在低温低转速的条件下诱导,目的蛋白仍以包涵体形式存在,在37℃,220 r/min,IPTG终浓度为1 mmol/L的条件下诱导,目的蛋白表达量较高,纯化得到蛋白VP0802并验证了该蛋白的免疫原性.表明在副溶血弧菌的外膜蛋白中存在多种与免疫原性相关的蛋白,且部分蛋白为首次发现具有免疫原性.
운용단백질조학급면역학기술사선화감정부용혈호균적외막단백중구유교호면역원성적외막단백,위방치부용혈고균류질병적아단위역묘적연발전정기출.용멸활적부용혈호균면역ICR소서제비항혈청;통과대외막단백진행SDS-PAGE화Western Blot분석사선면역원성단백,경MALDI-TOF/TOF-MS질보분석,대면역원성단백진행감정.극륭표체면역원성단백VP0802,병대해단백적표체조건진행우화,최후순화단백VP0802,병면역소서획득항혈청,통과Western Blot험증단백VP0802적면역원성.결과:면역소서소득도적항혈청효개위1:5 000;경면역인적분석학정료12충외막단백구유교호면역원성,기중10충외막단백경질보분석득도감정,분별위LPS-assembly protein,VP0802,Maltoporin,Chitoporin,OmpC,OmpA,OmpU,OmpK,VP1243화VP0966.성공구건면역원성단백VP0802적고표체균주;해균주재저온저전속적조건하유도,목적단백잉이포함체형식존재,재37℃,220 r/min,IPTG종농도위1 mmol/L적조건하유도,목적단백표체량교고,순화득도단백VP0802병험증료해단백적면역원성.표명재부용혈호균적외막단백중존재다충여면역원성상관적단백,차부분단백위수차발현구유면역원성.