分析测试学报
分析測試學報
분석측시학보
JOURNAL OF INSTRUMENTAL ANALYSIS
2013年
10期
1174-1179
,共6页
赵杰%高美须%潘家荣%兰丽平%睢珂%牟慧%许舒婷
趙傑%高美鬚%潘傢榮%蘭麗平%睢珂%牟慧%許舒婷
조걸%고미수%반가영%란려평%휴가%모혜%허서정
Pen a 1%表位抗体%免疫亲和柱%ELISA
Pen a 1%錶位抗體%免疫親和柱%ELISA
Pen a 1%표위항체%면역친화주%ELISA
Pen a 1%polyepitope antibody%immunoaffinity column%ELISA
以虾致敏蛋白Pen a 1(Tropomyosin)抗原表位为研究对象,建立了利用Pena 1表位抗体亲和纯化致敏蛋白的新方法.Fmoc法合成致敏Pen a 1蛋白的C端含有3个抗原表位的第247 ～284位氨基酸对应的多肽片段,应用马来酰亚胺法将多肽与KLH(匙孔血蓝蛋白)、BSA(牛血清白蛋白)偶联制备人工免疫抗原(Pep-tide-KLH)和人工包被抗原(Peptide-BSA),免疫人工抗原免疫纯种新西兰白兔,获得多克隆抗血清,抗血清经辛酸-硫酸铵及特异性血清纯化预装柱(HiTrap rProtein A FF)纯化后与溴化氰活化琼脂糖凝4B(CNBr-Activated Sepharose 4B)进行偶联.ELISA(酶联免疫吸附试验)测定该多克隆抗体效价为2.05×106,多肽对抗体的IC50(50％抑制浓度)为0.21 mg/L,交叉试验表明该抗体与虾中非Pena 1蛋白无交叉反应性;Bradford法测定CNBr-Activated Sepharose 4B与抗体的偶联率为90.76％.间接竞争ELISA测定1 mL偶联介质的吸附容量为2.84 mg Pen a 1,免疫亲和柱的加标回收率为89.6％～93.6％,亲和柱使用寿命为4次.
以蝦緻敏蛋白Pen a 1(Tropomyosin)抗原錶位為研究對象,建立瞭利用Pena 1錶位抗體親和純化緻敏蛋白的新方法.Fmoc法閤成緻敏Pen a 1蛋白的C耑含有3箇抗原錶位的第247 ～284位氨基痠對應的多肽片段,應用馬來酰亞胺法將多肽與KLH(匙孔血藍蛋白)、BSA(牛血清白蛋白)偶聯製備人工免疫抗原(Pep-tide-KLH)和人工包被抗原(Peptide-BSA),免疫人工抗原免疫純種新西蘭白兔,穫得多剋隆抗血清,抗血清經辛痠-硫痠銨及特異性血清純化預裝柱(HiTrap rProtein A FF)純化後與溴化氰活化瓊脂糖凝4B(CNBr-Activated Sepharose 4B)進行偶聯.ELISA(酶聯免疫吸附試驗)測定該多剋隆抗體效價為2.05×106,多肽對抗體的IC50(50％抑製濃度)為0.21 mg/L,交扠試驗錶明該抗體與蝦中非Pena 1蛋白無交扠反應性;Bradford法測定CNBr-Activated Sepharose 4B與抗體的偶聯率為90.76％.間接競爭ELISA測定1 mL偶聯介質的吸附容量為2.84 mg Pen a 1,免疫親和柱的加標迴收率為89.6％～93.6％,親和柱使用壽命為4次.
이하치민단백Pen a 1(Tropomyosin)항원표위위연구대상,건립료이용Pena 1표위항체친화순화치민단백적신방법.Fmoc법합성치민Pen a 1단백적C단함유3개항원표위적제247 ～284위안기산대응적다태편단,응용마래선아알법장다태여KLH(시공혈람단백)、BSA(우혈청백단백)우련제비인공면역항원(Pep-tide-KLH)화인공포피항원(Peptide-BSA),면역인공항원면역순충신서란백토,획득다극륭항혈청,항혈청경신산-류산안급특이성혈청순화예장주(HiTrap rProtein A FF)순화후여추화청활화경지당응4B(CNBr-Activated Sepharose 4B)진행우련.ELISA(매련면역흡부시험)측정해다극륭항체효개위2.05×106,다태대항체적IC50(50％억제농도)위0.21 mg/L,교차시험표명해항체여하중비Pena 1단백무교차반응성;Bradford법측정CNBr-Activated Sepharose 4B여항체적우련솔위90.76％.간접경쟁ELISA측정1 mL우련개질적흡부용량위2.84 mg Pen a 1,면역친화주적가표회수솔위89.6％～93.6％,친화주사용수명위4차.
