江苏大学学报(医学版)
江囌大學學報(醫學版)
강소대학학보(의학판)
JOURNAL OF JIANGSU UNIVERSITY (MEDICINE EDITION)
2013年
5期
397-401
,共5页
潘晓园%吴卫疆%刘云%张苗苗%刘霞%杜凤移%夏圣%邵启祥
潘曉園%吳衛疆%劉雲%張苗苗%劉霞%杜鳳移%夏聖%邵啟祥
반효완%오위강%류운%장묘묘%류하%두봉이%하골%소계상
psiCHECK-2%增强型绿色荧光蛋白%mLumin%HEK293T
psiCHECK-2%增彊型綠色熒光蛋白%mLumin%HEK293T
psiCHECK-2%증강형록색형광단백%mLumin%HEK293T
psiCHECK-2%enhanced green fluorescent protein%mLumin%HEK293T
目的:以psiCHECK-2质粒为骨架,构建带有远红外荧光蛋白mLumin和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)的双荧光蛋白报告基因质粒psiCHECK-2-eGFP-mLumin.方法:PCR扩增mLumin和eGFP基因片段,分别取代海肾荧光素酶和萤火虫荧光素酶插入psiCHECK-2质粒中,构建psiCHECK-2-eGFP-mLumin 双荧光蛋白报告基因重组质粒mLumin.通过测序验证插入序列,并将此质粒转入HEK293T细胞,分别用PCR和荧光显微镜鉴定eGFP和mLumin在细胞中的表达.结果:DNA测序结果证实连接在psiCHECK-2质粒上的eGFP和mLumin基因序列与基因库中的序列一致.将psiCHECK-2-eGFP-mLumin质粒转染HEK293T细胞,能成功表达eGFP和mLumin蛋白.结论:成功构建psiCHECK-2-eGFP-mLumin双荧光蛋白报告基因质粒,且可在真核细胞中表达.
目的:以psiCHECK-2質粒為骨架,構建帶有遠紅外熒光蛋白mLumin和增彊型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)的雙熒光蛋白報告基因質粒psiCHECK-2-eGFP-mLumin.方法:PCR擴增mLumin和eGFP基因片段,分彆取代海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶插入psiCHECK-2質粒中,構建psiCHECK-2-eGFP-mLumin 雙熒光蛋白報告基因重組質粒mLumin.通過測序驗證插入序列,併將此質粒轉入HEK293T細胞,分彆用PCR和熒光顯微鏡鑒定eGFP和mLumin在細胞中的錶達.結果:DNA測序結果證實連接在psiCHECK-2質粒上的eGFP和mLumin基因序列與基因庫中的序列一緻.將psiCHECK-2-eGFP-mLumin質粒轉染HEK293T細胞,能成功錶達eGFP和mLumin蛋白.結論:成功構建psiCHECK-2-eGFP-mLumin雙熒光蛋白報告基因質粒,且可在真覈細胞中錶達.
목적:이psiCHECK-2질립위골가,구건대유원홍외형광단백mLumin화증강형록색형광단백(enhanced green fluorescent protein,eGFP)적쌍형광단백보고기인질립psiCHECK-2-eGFP-mLumin.방법:PCR확증mLumin화eGFP기인편단,분별취대해신형광소매화형화충형광소매삽입psiCHECK-2질립중,구건psiCHECK-2-eGFP-mLumin 쌍형광단백보고기인중조질립mLumin.통과측서험증삽입서렬,병장차질립전입HEK293T세포,분별용PCR화형광현미경감정eGFP화mLumin재세포중적표체.결과:DNA측서결과증실련접재psiCHECK-2질립상적eGFP화mLumin기인서렬여기인고중적서렬일치.장psiCHECK-2-eGFP-mLumin질립전염HEK293T세포,능성공표체eGFP화mLumin단백.결론:성공구건psiCHECK-2-eGFP-mLumin쌍형광단백보고기인질립,차가재진핵세포중표체.