转化医学杂志
轉化醫學雜誌
전화의학잡지
TRANSLATIONAL MEDICINE JOURNAL
2014年
1期
31-36
,共6页
曹芳英%张宁坤%高连如%朱智明
曹芳英%張寧坤%高連如%硃智明
조방영%장저곤%고련여%주지명
脐带华通胶%间充质干细胞%血管内皮细胞%APJ受体%细胞标志物
臍帶華通膠%間充質榦細胞%血管內皮細胞%APJ受體%細胞標誌物
제대화통효%간충질간세포%혈관내피세포%APJ수체%세포표지물
目的 研究人脐带华通胶间充质干细胞(human umbilical cord Wharton's Jelly-mesenchymal stem cells,HUW-MSCs)体外诱导向内皮细胞分化过程中表面APJ受体表达的变化,探讨APJ是否可作为鉴定内皮细胞的早期细胞表面标志物.方法 剖宫产取脐带后分别用酶消化和组织贴壁法培养获得脐带华通胶间充质干细胞,用酶消化法获得人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs).取2× 107第2代HUW-MSCs用单克隆APJ-APC荧光抗体标志后行流式分选,测定HUW-MSCs实验前细胞表面表达APJ的水平.实验分3组:诱导组MSCs用含血管内皮细胞生长因子5μg/L、碱性成纤维细胞生长因子10 μg/L、表皮生长因子10 μg/L和10％胎牛血清(fetal bovine serum,FBS) M199培养基培养;共同培养组MSCs先与HUVECs在Transwell 6孔培养板中,用含10％FBS的M199培养5～7d后转入25 cm2培养瓶中继续培养,培养液为含10％FBS的M199和培养1d内皮细胞的M199(2:1)混合培养基;单纯培养组细胞培养基为含10％FBS的M199.培养周期为14 d.分别于第7、10、14天流式检测各组细胞APJ表达水平,同时检测内皮细胞表面APJ水平作为阳性对照.另外于第7、14天检测3个实验组、内皮细胞组、HUW-MSCs组内皮细胞早期标志物CD309表达变化情况,比较各实验组之间APJ与CD309变化趋势.结果 HUW-MSCs流式分选出5×103APJ+-HUW-MSCs,表面表达APJ基本呈阴性.诱导组、共同培养组和单纯培养组细胞形态均较HUW-MSCs有显著改变,诱导组呈圆形、线性、网状,共同培养、单纯培养组细胞呈卵圆形、长梭形.另外,诱导组生长最快,增殖能力最强;单纯培养组次之;共同培养组细胞生长缓慢,增殖能力最弱.第7、10、14天,3组细胞CD309表达分别为诱导组1.8％、2.6％和8.8％,共培养组0.5％、2.5％和4.7％,单纯培养组0.3％、2.1％和2.7％.第7、10、14天各组APJ阳性表达率分别为诱导组0.5％、0.9％和5.2％,共培养组0.4％、0.8％和3.0％,单纯培养组0.2％、0.6％和2.1％.结论 HUW-MSCs表面APJ表达基本呈阴性,HUW-MSCs向内皮细胞诱导分化过程中APJ表达逐渐上调,与内皮细胞早期标志物CD309变化趋势基本一致,可作为早期内皮细胞鉴定的标志物.
目的 研究人臍帶華通膠間充質榦細胞(human umbilical cord Wharton's Jelly-mesenchymal stem cells,HUW-MSCs)體外誘導嚮內皮細胞分化過程中錶麵APJ受體錶達的變化,探討APJ是否可作為鑒定內皮細胞的早期細胞錶麵標誌物.方法 剖宮產取臍帶後分彆用酶消化和組織貼壁法培養穫得臍帶華通膠間充質榦細胞,用酶消化法穫得人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs).取2× 107第2代HUW-MSCs用單剋隆APJ-APC熒光抗體標誌後行流式分選,測定HUW-MSCs實驗前細胞錶麵錶達APJ的水平.實驗分3組:誘導組MSCs用含血管內皮細胞生長因子5μg/L、堿性成纖維細胞生長因子10 μg/L、錶皮生長因子10 μg/L和10％胎牛血清(fetal bovine serum,FBS) M199培養基培養;共同培養組MSCs先與HUVECs在Transwell 6孔培養闆中,用含10％FBS的M199培養5～7d後轉入25 cm2培養瓶中繼續培養,培養液為含10％FBS的M199和培養1d內皮細胞的M199(2:1)混閤培養基;單純培養組細胞培養基為含10％FBS的M199.培養週期為14 d.分彆于第7、10、14天流式檢測各組細胞APJ錶達水平,同時檢測內皮細胞錶麵APJ水平作為暘性對照.另外于第7、14天檢測3箇實驗組、內皮細胞組、HUW-MSCs組內皮細胞早期標誌物CD309錶達變化情況,比較各實驗組之間APJ與CD309變化趨勢.結果 HUW-MSCs流式分選齣5×103APJ+-HUW-MSCs,錶麵錶達APJ基本呈陰性.誘導組、共同培養組和單純培養組細胞形態均較HUW-MSCs有顯著改變,誘導組呈圓形、線性、網狀,共同培養、單純培養組細胞呈卵圓形、長梭形.另外,誘導組生長最快,增殖能力最彊;單純培養組次之;共同培養組細胞生長緩慢,增殖能力最弱.第7、10、14天,3組細胞CD309錶達分彆為誘導組1.8％、2.6％和8.8％,共培養組0.5％、2.5％和4.7％,單純培養組0.3％、2.1％和2.7％.第7、10、14天各組APJ暘性錶達率分彆為誘導組0.5％、0.9％和5.2％,共培養組0.4％、0.8％和3.0％,單純培養組0.2％、0.6％和2.1％.結論 HUW-MSCs錶麵APJ錶達基本呈陰性,HUW-MSCs嚮內皮細胞誘導分化過程中APJ錶達逐漸上調,與內皮細胞早期標誌物CD309變化趨勢基本一緻,可作為早期內皮細胞鑒定的標誌物.
목적 연구인제대화통효간충질간세포(human umbilical cord Wharton's Jelly-mesenchymal stem cells,HUW-MSCs)체외유도향내피세포분화과정중표면APJ수체표체적변화,탐토APJ시부가작위감정내피세포적조기세포표면표지물.방법 부궁산취제대후분별용매소화화조직첩벽법배양획득제대화통효간충질간세포,용매소화법획득인제정맥내피세포(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs).취2× 107제2대HUW-MSCs용단극륭APJ-APC형광항체표지후행류식분선,측정HUW-MSCs실험전세포표면표체APJ적수평.실험분3조:유도조MSCs용함혈관내피세포생장인자5μg/L、감성성섬유세포생장인자10 μg/L、표피생장인자10 μg/L화10％태우혈청(fetal bovine serum,FBS) M199배양기배양;공동배양조MSCs선여HUVECs재Transwell 6공배양판중,용함10％FBS적M199배양5～7d후전입25 cm2배양병중계속배양,배양액위함10％FBS적M199화배양1d내피세포적M199(2:1)혼합배양기;단순배양조세포배양기위함10％FBS적M199.배양주기위14 d.분별우제7、10、14천류식검측각조세포APJ표체수평,동시검측내피세포표면APJ수평작위양성대조.령외우제7、14천검측3개실험조、내피세포조、HUW-MSCs조내피세포조기표지물CD309표체변화정황,비교각실험조지간APJ여CD309변화추세.결과 HUW-MSCs류식분선출5×103APJ+-HUW-MSCs,표면표체APJ기본정음성.유도조、공동배양조화단순배양조세포형태균교HUW-MSCs유현저개변,유도조정원형、선성、망상,공동배양、단순배양조세포정란원형、장사형.령외,유도조생장최쾌,증식능력최강;단순배양조차지;공동배양조세포생장완만,증식능력최약.제7、10、14천,3조세포CD309표체분별위유도조1.8％、2.6％화8.8％,공배양조0.5％、2.5％화4.7％,단순배양조0.3％、2.1％화2.7％.제7、10、14천각조APJ양성표체솔분별위유도조0.5％、0.9％화5.2％,공배양조0.4％、0.8％화3.0％,단순배양조0.2％、0.6％화2.1％.결론 HUW-MSCs표면APJ표체기본정음성,HUW-MSCs향내피세포유도분화과정중APJ표체축점상조,여내피세포조기표지물CD309변화추세기본일치,가작위조기내피세포감정적표지물.
