中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
3期
232-235
,共4页
刘娇%崔宁%周泷%牛慧%张艳禾%李刚%谢芳%唐月敏%倪宏波
劉嬌%崔寧%週瀧%牛慧%張豔禾%李剛%謝芳%唐月敏%倪宏波
류교%최저%주롱%우혜%장염화%리강%사방%당월민%예굉파
副猪嗜血杆菌%自转运三聚体VtaA1%原核表达%免疫保护
副豬嗜血桿菌%自轉運三聚體VtaA1%原覈錶達%免疫保護
부저기혈간균%자전운삼취체VtaA1%원핵표체%면역보호
Haemophilus parasuis%trimeric autotransporters VtaA1%prokaryotic expression%immune protection
为鉴定副猪嗜血杆菌(HPS)自转运三聚体VtaA1蛋白免疫保护效率,本研究以血清5型HPS株基因组为模板,通过PCR方法扩增VtaA1编码基因的N-端、C-端和中间区段,并将各基因片段克隆于表达载体pET-28a(+)中构建重组表达质粒pET-VtaA1N、pET-VtaA1C和pET-VtaA1M,将重组质粒分别转化到E.coli BL21(DE3)感受态中,在22℃和37℃条件下经IPTG诱导表达,目的蛋白均以包涵体形式存在.VtaA1M和VtaA1C用亲和层析纯化,但VtaA1N无法纯化.将纯化后的VtaA1M和VtaA1C分别免疫5周龄昆明小鼠并制备免疫血清,ELISA检测结果显示VtaA 1M和VtaA1C血清效价分别在1∶105和1∶404以上,表明VtaA1M和VtaA 1C具有良好的免疫原性.免疫的小鼠分别用HPS血清5型分离株攻毒,结果显示VtaA1M和VtaA1C免疫的小鼠对该强毒株的攻击均能够提供60％的保护,表明VtaA1M和VtaA 1C可以作为亚单位疫苗的有效成分.
為鑒定副豬嗜血桿菌(HPS)自轉運三聚體VtaA1蛋白免疫保護效率,本研究以血清5型HPS株基因組為模闆,通過PCR方法擴增VtaA1編碼基因的N-耑、C-耑和中間區段,併將各基因片段剋隆于錶達載體pET-28a(+)中構建重組錶達質粒pET-VtaA1N、pET-VtaA1C和pET-VtaA1M,將重組質粒分彆轉化到E.coli BL21(DE3)感受態中,在22℃和37℃條件下經IPTG誘導錶達,目的蛋白均以包涵體形式存在.VtaA1M和VtaA1C用親和層析純化,但VtaA1N無法純化.將純化後的VtaA1M和VtaA1C分彆免疫5週齡昆明小鼠併製備免疫血清,ELISA檢測結果顯示VtaA 1M和VtaA1C血清效價分彆在1∶105和1∶404以上,錶明VtaA1M和VtaA 1C具有良好的免疫原性.免疫的小鼠分彆用HPS血清5型分離株攻毒,結果顯示VtaA1M和VtaA1C免疫的小鼠對該彊毒株的攻擊均能夠提供60％的保護,錶明VtaA1M和VtaA 1C可以作為亞單位疫苗的有效成分.
위감정부저기혈간균(HPS)자전운삼취체VtaA1단백면역보호효솔,본연구이혈청5형HPS주기인조위모판,통과PCR방법확증VtaA1편마기인적N-단、C-단화중간구단,병장각기인편단극륭우표체재체pET-28a(+)중구건중조표체질립pET-VtaA1N、pET-VtaA1C화pET-VtaA1M,장중조질립분별전화도E.coli BL21(DE3)감수태중,재22℃화37℃조건하경IPTG유도표체,목적단백균이포함체형식존재.VtaA1M화VtaA1C용친화층석순화,단VtaA1N무법순화.장순화후적VtaA1M화VtaA1C분별면역5주령곤명소서병제비면역혈청,ELISA검측결과현시VtaA 1M화VtaA1C혈청효개분별재1∶105화1∶404이상,표명VtaA1M화VtaA 1C구유량호적면역원성.면역적소서분별용HPS혈청5형분리주공독,결과현시VtaA1M화VtaA1C면역적소서대해강독주적공격균능구제공60％적보호,표명VtaA1M화VtaA 1C가이작위아단위역묘적유효성분.
