中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
3期
218-222
,共5页
胡骑%何于雯%信爱国%李华春
鬍騎%何于雯%信愛國%李華春
호기%하우문%신애국%리화춘
口蹄疫病毒%实时定量RT-PCR%病毒复制
口蹄疫病毒%實時定量RT-PCR%病毒複製
구제역병독%실시정량RT-PCR%병독복제
foot-and-mouth disease virus%qRT-PCR%virus replication
为分析口蹄疫病毒(FMDV)在细胞培养物中的复制动态,本实验以18S rRNA为内参基因,建立检测FMDV 3D基因的SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR (qRT-PCR)方法,以双标准曲线法分析细胞总RNA中FMDV基因组当量(GE/μg)的方法,结果表明所建立的qRT-PCR方法最小检出量为101.5 TCID50/0.1 mL,模板稀释度在107范围内呈良好的线性关系,与其他病毒无交叉反应.应用该方法测定了亚洲l型FMDV兔化弱毒ZB(att)株和其体外拯救病毒vZB株的感染细胞后的复制动态,与TCID50方法进行了比较.结果显示ZB(att)和vZB在4h测定病毒TCID50分别为10-2.17 TCID50/0.1 mL和10-2.00 TCID50/0.lmL,细胞悬液内病毒RNA水平分别为101.08 GE/μg和101.02 GE/μg;至24 h,细胞均产生100％CPE,病毒TCID50分别为10-5.33 TCID50/0.1 mL和10-5.17 TCID50/0.1 mL,病毒RNA水平分别为102.81 GE/μg和102.80 GE/μg,两株病毒在BHK-21细胞内复制效率相似.本研究为探索FMDV突变病毒复制和感染性差异提供了一种快速评价方法.
為分析口蹄疫病毒(FMDV)在細胞培養物中的複製動態,本實驗以18S rRNA為內參基因,建立檢測FMDV 3D基因的SYBR Green Ⅰ實時定量RT-PCR (qRT-PCR)方法,以雙標準麯線法分析細胞總RNA中FMDV基因組噹量(GE/μg)的方法,結果錶明所建立的qRT-PCR方法最小檢齣量為101.5 TCID50/0.1 mL,模闆稀釋度在107範圍內呈良好的線性關繫,與其他病毒無交扠反應.應用該方法測定瞭亞洲l型FMDV兔化弱毒ZB(att)株和其體外拯救病毒vZB株的感染細胞後的複製動態,與TCID50方法進行瞭比較.結果顯示ZB(att)和vZB在4h測定病毒TCID50分彆為10-2.17 TCID50/0.1 mL和10-2.00 TCID50/0.lmL,細胞懸液內病毒RNA水平分彆為101.08 GE/μg和101.02 GE/μg;至24 h,細胞均產生100％CPE,病毒TCID50分彆為10-5.33 TCID50/0.1 mL和10-5.17 TCID50/0.1 mL,病毒RNA水平分彆為102.81 GE/μg和102.80 GE/μg,兩株病毒在BHK-21細胞內複製效率相似.本研究為探索FMDV突變病毒複製和感染性差異提供瞭一種快速評價方法.
위분석구제역병독(FMDV)재세포배양물중적복제동태,본실험이18S rRNA위내삼기인,건립검측FMDV 3D기인적SYBR Green Ⅰ실시정량RT-PCR (qRT-PCR)방법,이쌍표준곡선법분석세포총RNA중FMDV기인조당량(GE/μg)적방법,결과표명소건립적qRT-PCR방법최소검출량위101.5 TCID50/0.1 mL,모판희석도재107범위내정량호적선성관계,여기타병독무교차반응.응용해방법측정료아주l형FMDV토화약독ZB(att)주화기체외증구병독vZB주적감염세포후적복제동태,여TCID50방법진행료비교.결과현시ZB(att)화vZB재4h측정병독TCID50분별위10-2.17 TCID50/0.1 mL화10-2.00 TCID50/0.lmL,세포현액내병독RNA수평분별위101.08 GE/μg화101.02 GE/μg;지24 h,세포균산생100％CPE,병독TCID50분별위10-5.33 TCID50/0.1 mL화10-5.17 TCID50/0.1 mL,병독RNA수평분별위102.81 GE/μg화102.80 GE/μg,량주병독재BHK-21세포내복제효솔상사.본연구위탐색FMDV돌변병독복제화감염성차이제공료일충쾌속평개방법.
