中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
3期
201-204
,共4页
程子英%高洋%王铭%郑君%贾洪林%赵权
程子英%高洋%王銘%鄭君%賈洪林%趙權
정자영%고양%왕명%정군%가홍림%조권
弓形虫%AMA1羧基端%酵母双杂交%自激活
弓形蟲%AMA1羧基耑%酵母雙雜交%自激活
궁형충%AMA1최기단%효모쌍잡교%자격활
Toxoplasma gondii%AMA1 C-terminal%yeast two-hybrid system%self-activation
为筛选弓形虫AMA1基因羧基端(AMA1c)在弓形虫中的相互作用分子,本研究采用MatchmakerTMGold酵母双杂交系统,构建了弓形虫RH株酵母双杂交cDNA文库,文库滴度达到4.26×107 cfu/mL.以构建的pGBKT7-AMA1c诱饵质粒,使用PEG/LiAc法转化酵母菌株Y2H,利用表型筛选法检测AMA1c的自激活作用并进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆,根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证.结果表明,诱饵蛋白在酵母双杂交系统中具有无毒性和自激活作用,而且通过酵母双杂交筛选共得到13个与AMA1c蛋白相互作用的虫体蛋白.本研究结果为进一步研究AMA1c的功能奠定了基础.
為篩選弓形蟲AMA1基因羧基耑(AMA1c)在弓形蟲中的相互作用分子,本研究採用MatchmakerTMGold酵母雙雜交繫統,構建瞭弓形蟲RH株酵母雙雜交cDNA文庫,文庫滴度達到4.26×107 cfu/mL.以構建的pGBKT7-AMA1c誘餌質粒,使用PEG/LiAc法轉化酵母菌株Y2H,利用錶型篩選法檢測AMA1c的自激活作用併進行酵母雙雜交篩選,得到暘性剋隆,根據序列比對分析結果,進一步進行共轉化驗證.結果錶明,誘餌蛋白在酵母雙雜交繫統中具有無毒性和自激活作用,而且通過酵母雙雜交篩選共得到13箇與AMA1c蛋白相互作用的蟲體蛋白.本研究結果為進一步研究AMA1c的功能奠定瞭基礎.
위사선궁형충AMA1기인최기단(AMA1c)재궁형충중적상호작용분자,본연구채용MatchmakerTMGold효모쌍잡교계통,구건료궁형충RH주효모쌍잡교cDNA문고,문고적도체도4.26×107 cfu/mL.이구건적pGBKT7-AMA1c유이질립,사용PEG/LiAc법전화효모균주Y2H,이용표형사선법검측AMA1c적자격활작용병진행효모쌍잡교사선,득도양성극륭,근거서렬비대분석결과,진일보진행공전화험증.결과표명,유이단백재효모쌍잡교계통중구유무독성화자격활작용,이차통과효모쌍잡교사선공득도13개여AMA1c단백상호작용적충체단백.본연구결과위진일보연구AMA1c적공능전정료기출.
