中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
3期
187-191
,共5页
刘畅%李磊%于立新%么宏强%周建华%马学恩
劉暢%李磊%于立新%麽宏彊%週建華%馬學恩
류창%리뢰%우립신%요굉강%주건화%마학은
绵羊肺腺瘤病毒%透明质酸酶-2%真核表达%NIH 3T3细胞系
綿羊肺腺瘤病毒%透明質痠酶-2%真覈錶達%NIH 3T3細胞繫
면양폐선류병독%투명질산매-2%진핵표체%NIH 3T3세포계
Jaagsiekte retrovirus%hyaluronoglucosaminidase 2%consistent expression%NIH 3T3 cell line
为构建稳定表达绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)受体透明质酸酶-2(Hyal-2)的NIH 3T3细胞系,本研究采用RT-PCR方法从绵羊瘤胃组织总RNA中扩增Hyal-2的cDNA,并引入标签多肽HA序列和限制性内切酶位点,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA-Hyal2-HA.将该重组质粒转染NIH 3T3细胞,并利用G418筛选、纯化,获得了稳定表达JSRV受体蛋白Hyal-2的NIH 3T3细胞系.qPCR、间接免疫荧光及western blot检测结果表明,该细胞系在传代至15代后,Hyal2-HA在NIH 3T3细胞中仍然能够稳定表达,并且主要分布于细胞膜上.JSRV囊膜蛋白诱导细胞转化试验显示,该蛋白的瞬时表达可以导致NIH 3T3细胞出现转化聚积灶,但失去了对稳定表达绵羊Hyal-2蛋白NIH 3T3细胞系的诱导转化作用,其作用机制尚待阐明.该细胞系的建立为进一步研究JSRV与其受体的相互作用致瘤机制奠定了基础.
為構建穩定錶達綿羊肺腺瘤病毒(JSRV)受體透明質痠酶-2(Hyal-2)的NIH 3T3細胞繫,本研究採用RT-PCR方法從綿羊瘤胃組織總RNA中擴增Hyal-2的cDNA,併引入標籤多肽HA序列和限製性內切酶位點,將其剋隆至真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)中,構建重組質粒pcDNA-Hyal2-HA.將該重組質粒轉染NIH 3T3細胞,併利用G418篩選、純化,穫得瞭穩定錶達JSRV受體蛋白Hyal-2的NIH 3T3細胞繫.qPCR、間接免疫熒光及western blot檢測結果錶明,該細胞繫在傳代至15代後,Hyal2-HA在NIH 3T3細胞中仍然能夠穩定錶達,併且主要分佈于細胞膜上.JSRV囊膜蛋白誘導細胞轉化試驗顯示,該蛋白的瞬時錶達可以導緻NIH 3T3細胞齣現轉化聚積竈,但失去瞭對穩定錶達綿羊Hyal-2蛋白NIH 3T3細胞繫的誘導轉化作用,其作用機製尚待闡明.該細胞繫的建立為進一步研究JSRV與其受體的相互作用緻瘤機製奠定瞭基礎.
위구건은정표체면양폐선류병독(JSRV)수체투명질산매-2(Hyal-2)적NIH 3T3세포계,본연구채용RT-PCR방법종면양류위조직총RNA중확증Hyal-2적cDNA,병인입표첨다태HA서렬화한제성내절매위점,장기극륭지진핵표체질립pcDNA3.1(+)중,구건중조질립pcDNA-Hyal2-HA.장해중조질립전염NIH 3T3세포,병이용G418사선、순화,획득료은정표체JSRV수체단백Hyal-2적NIH 3T3세포계.qPCR、간접면역형광급western blot검측결과표명,해세포계재전대지15대후,Hyal2-HA재NIH 3T3세포중잉연능구은정표체,병차주요분포우세포막상.JSRV낭막단백유도세포전화시험현시,해단백적순시표체가이도치NIH 3T3세포출현전화취적조,단실거료대은정표체면양Hyal-2단백NIH 3T3세포계적유도전화작용,기작용궤제상대천명.해세포계적건립위진일보연구JSRV여기수체적상호작용치류궤제전정료기출.
