CAJ | 학술논문

目的：通过免疫组化S-P法及RT-PCR法测定HIF-1α、MGMT、CD133在胶质母细胞瘤细胞中的表达，探讨三者在胶质母细胞瘤中的表达相关性。方法收集自2010年12月至2012年12月手术切除病理证实的胶质母细胞瘤（WHO Ⅳ级）33例，同期收集低级别胶质瘤25例（WHOⅠ～Ⅱ级）作为对照组，收集脑深部肿瘤皮层造瘘正常脑组织5例，作为阴性对照组。采用免疫组织化学S-P法检测HIF-1α、MGMT、CD133在人脑胶质母细胞瘤、低级别胶质瘤及正常脑组织中的表达；应用RT-PCR法测定HIF-1α、MGMT、CD133在胶质母细胞瘤细胞、低级别胶质瘤中的mRNA的表达，统计软件选用SPSS 13.0，计量资料采用卡方检验。相关统计分析采用Spearman等级相关分析。以α=0.05为检验水准，当P<0.05时具有统计学意义。结果免疫组织化学S-P法检测33例胶质母细胞瘤，其中HIF-1α阳性表达32例（96.7%）， MGMT阳性表达23例（69.7%），CD133阳性表达33例（100%），均阳性表达23例（69.7%）。对照组25例低级别胶质瘤中HIF-1α阳性表达9例（36.0%），MGMT阳性表达8例（32.0%），CD133阳性表达8例（32.0%），均阳性表达4例（16.0%）。在正常脑组织中HIF-1α、MGMT、CD133均阴性表达。可见随肿瘤级别升高，HIF-1α、MGMT、CD133表达显著升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。RT-PCR法测定HIF-1α、MGMT、CD133在低级别胶质瘤及胶质母细胞瘤中mRNA的表达，其中HIF-1αmRNA 在低级别胶质瘤中相对定量0.23±0.05，在胶质母细胞瘤中相对定量0.87±0.12；MGMT mRNA 在低级别胶质瘤中相对定量0.27±0.07，在胶质母细胞瘤中相对定量0.67±0.09；CD133 mRNA在低级别胶质瘤中相对定量0.16±0.05，在胶质母细胞瘤中相对定量0.57±0.08。相关性分析发现 HIF-1α与 MGMT 的 r=0.91、P<0.05，HIF-1α与CD133的r=0.85、P<0.05，MGMT与CD133的r=0.802、P<0.05，提示三者均存在正相关性。结论随肿瘤级别升高，HIF-1α、MGMT、CD133阳性表达率升高。三者的相关性研究提示HIF-1α与MGMT、HIF-1α与 CD133、MGMT 与 CD133均存在正相关性。提示在胶质母细胞瘤的发生、发展、复发、预后中三者存在协同作用，通过干预不同因子的表达，为胶质母细胞瘤的治疗提供新的思路及方向。目的：通過免疫組化S-P法及RT-PCR法測定HIF-1α、MGMT、CD133在膠質母細胞瘤細胞中的錶達，探討三者在膠質母細胞瘤中的錶達相關性。方法收集自2010年12月至2012年12月手術切除病理證實的膠質母細胞瘤（WHO Ⅳ級）33例，同期收集低級彆膠質瘤25例（WHOⅠ～Ⅱ級）作為對照組，收集腦深部腫瘤皮層造瘺正常腦組織5例，作為陰性對照組。採用免疫組織化學S-P法檢測HIF-1α、MGMT、CD133在人腦膠質母細胞瘤、低級彆膠質瘤及正常腦組織中的錶達；應用RT-PCR法測定HIF-1α、MGMT、CD133在膠質母細胞瘤細胞、低級彆膠質瘤中的mRNA的錶達，統計軟件選用SPSS 13.0，計量資料採用卡方檢驗。相關統計分析採用Spearman等級相關分析。以α=0.05為檢驗水準，噹P<0.05時具有統計學意義。結果免疫組織化學S-P法檢測33例膠質母細胞瘤，其中HIF-1α暘性錶達32例（96.7%）， MGMT暘性錶達23例（69.7%），CD133暘性錶達33例（100%），均暘性錶達23例（69.7%）。對照組25例低級彆膠質瘤中HIF-1α暘性錶達9例（36.0%），MGMT暘性錶達8例（32.0%），CD133暘性錶達8例（32.0%），均暘性錶達4例（16.0%）。在正常腦組織中HIF-1α、MGMT、CD133均陰性錶達。可見隨腫瘤級彆升高，HIF-1α、MGMT、CD133錶達顯著升高，差異具有統計學意義（P<0.05）。RT-PCR法測定HIF-1α、MGMT、CD133在低級彆膠質瘤及膠質母細胞瘤中mRNA的錶達，其中HIF-1αmRNA 在低級彆膠質瘤中相對定量0.23±0.05，在膠質母細胞瘤中相對定量0.87±0.12；MGMT mRNA 在低級彆膠質瘤中相對定量0.27±0.07，在膠質母細胞瘤中相對定量0.67±0.09；CD133 mRNA在低級彆膠質瘤中相對定量0.16±0.05，在膠質母細胞瘤中相對定量0.57±0.08。相關性分析髮現 HIF-1α與 MGMT 的 r=0.91、P<0.05，HIF-1α與CD133的r=0.85、P<0.05，MGMT與CD133的r=0.802、P<0.05，提示三者均存在正相關性。結論隨腫瘤級彆升高，HIF-1α、MGMT、CD133暘性錶達率升高。三者的相關性研究提示HIF-1α與MGMT、HIF-1α與 CD133、MGMT 與 CD133均存在正相關性。提示在膠質母細胞瘤的髮生、髮展、複髮、預後中三者存在協同作用，通過榦預不同因子的錶達，為膠質母細胞瘤的治療提供新的思路及方嚮。
목적：통과면역조화S-P법급RT-PCR법측정HIF-1α、MGMT、CD133재효질모세포류세포중적표체，탐토삼자재효질모세포류중적표체상관성。방법수집자2010년12월지2012년12월수술절제병리증실적효질모세포류（WHO Ⅳ급）33례，동기수집저급별효질류25례（WHOⅠ～Ⅱ급）작위대조조，수집뇌심부종류피층조루정상뇌조직5례，작위음성대조조。채용면역조직화학S-P법검측HIF-1α、MGMT、CD133재인뇌효질모세포류、저급별효질류급정상뇌조직중적표체；응용RT-PCR법측정HIF-1α、MGMT、CD133재효질모세포류세포、저급별효질류중적mRNA적표체，통계연건선용SPSS 13.0，계량자료채용잡방검험。상관통계분석채용Spearman등급상관분석。이α=0.05위검험수준，당P<0.05시구유통계학의의。결과면역조직화학S-P법검측33례효질모세포류，기중HIF-1α양성표체32례（96.7%）， MGMT양성표체23례（69.7%），CD133양성표체33례（100%），균양성표체23례（69.7%）。대조조25례저급별효질류중HIF-1α양성표체9례（36.0%），MGMT양성표체8례（32.0%），CD133양성표체8례（32.0%），균양성표체4례（16.0%）。재정상뇌조직중HIF-1α、MGMT、CD133균음성표체。가견수종류급별승고，HIF-1α、MGMT、CD133표체현저승고，차이구유통계학의의（P<0.05）。RT-PCR법측정HIF-1α、MGMT、CD133재저급별효질류급효질모세포류중mRNA적표체，기중HIF-1αmRNA 재저급별효질류중상대정량0.23±0.05，재효질모세포류중상대정량0.87±0.12；MGMT mRNA 재저급별효질류중상대정량0.27±0.07，재효질모세포류중상대정량0.67±0.09；CD133 mRNA재저급별효질류중상대정량0.16±0.05，재효질모세포류중상대정량0.57±0.08。상관성분석발현 HIF-1α여 MGMT 적 r=0.91、P<0.05，HIF-1α여CD133적r=0.85、P<0.05，MGMT여CD133적r=0.802、P<0.05，제시삼자균존재정상관성。결론수종류급별승고，HIF-1α、MGMT、CD133양성표체솔승고。삼자적상관성연구제시HIF-1α여MGMT、HIF-1α여 CD133、MGMT 여 CD133균존재정상관성。제시재효질모세포류적발생、발전、복발、예후중삼자존재협동작용，통과간예불동인자적표체，위효질모세포류적치료제공신적사로급방향。
Objective To evaluate the relative expression and correlation of HIF-1α, MGMT and CD133 in glioblastoma by the methods of immunohistochemistry S-P and Real-time quantitative PCR(RT-PCR). Methods All sample tissues were collected from surgeries and proved by pathology in Hebei Tumor Hospital between Dec 2010 and Dec 2012. 33 samples of glioblastomas were used as experimental group and 25 samples of low grade gliomas as control group. 5 normal cortical tissues from the deep brain tumors were used as negative control group. Immunohistochemistry S-P and RT-PCR were undertaken to test HIF-1α, MGMT and CD133 protein and mRNA expression levels in glioblastoma, low grade glioma and normal brain tissue. SPSS 13.0 software was used for statistical analysis in this study. Differences with a probability value of P<0.05 were considered statistically significant. Results The positive rates of HIF-1α, MGMT and CD133 expression in 33 cases of glioblastomas were 96.7%(32/33), 69.7%(23/33) and 100%(33/33) respectively by immunohistochemistry S-P method. However, for the control group of low grade gliomas, the positive rates of HIF-1α, MGMT and CD133 expression were 36.0%(9/25), 32.0%(8/25) and 32.0%(8/25). There was no expression of these proteins in normal brain tissue. The expression of HIF-1α, MGMT and CD133 were significantly elevated with the increased tumor grade(P<0.05). The mRNA levels of HIF-1α, MGMT and CD133 were tested by RT-PCR. The relative quantities of HIF-1α, MGMT and CD133 mRNA were 0.23±0.05, 0.27±0.07, 0.16±0.05 in low grade gliomas but 0.87±0.12, 0.67±0.09 and 0.57±0.08 in glioblastomas. The correlation analyses of HIF-1αand MGMT, HIF-1αand CD133, MGMT and CD133 expression showed that there were significant positive correlations among the three genes and the differences had statistical significance(rHIF-1αand MGMT=0.91, P<0.05;rHIF-1αand CD133=0.85, P<0.05;rMGMT and CD133=0.802, P<0.05). Conclusions The expression levels of HIF-1α, MGMT and CD133 are elevated with the increased tumor grade. The correlation analyses of HIF-1αand MGMT, HIF-1αand CD133, MGMT and CD133 expression show that there are significant positive correlations among the three genes. It suggests that it has associated functions among HIF-1α, MGMT and CD133 in the development, recurrence and prognosis of glioblastoma,and this study gives us new thoughts and ideas for glioblastoma treatments by inhibiting the expressions of different factors.