江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
2期
238-241
,共4页
张涛涛%王兰%龚频%陈福欣
張濤濤%王蘭%龔頻%陳福訢
장도도%왕란%공빈%진복흔
环介导等温扩增技术%金黄色葡萄球菌%耐热核酸酶基因nuc%快速检测
環介導等溫擴增技術%金黃色葡萄毬菌%耐熱覈痠酶基因nuc%快速檢測
배개도등온확증기술%금황색포도구균%내열핵산매기인nuc%쾌속검측
研究了用环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测金黄色葡萄球菌的方法.首先根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因nuc中的保守序列设计特异性引物,建立并优化反应条件,然后通过对金黄色葡萄球菌及其他菌种的对比试验,验证引物的特异性并确定方法的检测限.结果表明:在用加环引物的条件下,LAMP反应体系于60℃反应35 min即可扩增成功,而用未加环的引物则需45 min才能看到白色絮状沉淀.对2株金黄色葡萄球菌、3株大肠杆菌、1株醋酸杆菌、1株沙门氏菌进行同步检测,结果发现2株金黄色葡萄球菌均显示阳性,而其他菌株均显示阴性.研究确定了LAMP检测纯培养的金黄色葡萄球菌的最低检测限为100 fg,比PCR的最低检测限低2个数量级.由研究结果可以看出,LAMP法检测金黄色葡萄球菌操作简便,有较高的特异性、灵敏度,为快速检测食品中的致病菌提供了较好的技术平台.
研究瞭用環介導等溫擴增技術(LAMP)快速檢測金黃色葡萄毬菌的方法.首先根據金黃色葡萄毬菌的耐熱覈痠酶基因nuc中的保守序列設計特異性引物,建立併優化反應條件,然後通過對金黃色葡萄毬菌及其他菌種的對比試驗,驗證引物的特異性併確定方法的檢測限.結果錶明:在用加環引物的條件下,LAMP反應體繫于60℃反應35 min即可擴增成功,而用未加環的引物則需45 min纔能看到白色絮狀沉澱.對2株金黃色葡萄毬菌、3株大腸桿菌、1株醋痠桿菌、1株沙門氏菌進行同步檢測,結果髮現2株金黃色葡萄毬菌均顯示暘性,而其他菌株均顯示陰性.研究確定瞭LAMP檢測純培養的金黃色葡萄毬菌的最低檢測限為100 fg,比PCR的最低檢測限低2箇數量級.由研究結果可以看齣,LAMP法檢測金黃色葡萄毬菌操作簡便,有較高的特異性、靈敏度,為快速檢測食品中的緻病菌提供瞭較好的技術平檯.
연구료용배개도등온확증기술(LAMP)쾌속검측금황색포도구균적방법.수선근거금황색포도구균적내열핵산매기인nuc중적보수서렬설계특이성인물,건립병우화반응조건,연후통과대금황색포도구균급기타균충적대비시험,험증인물적특이성병학정방법적검측한.결과표명:재용가배인물적조건하,LAMP반응체계우60℃반응35 min즉가확증성공,이용미가배적인물칙수45 min재능간도백색서상침정.대2주금황색포도구균、3주대장간균、1주작산간균、1주사문씨균진행동보검측,결과발현2주금황색포도구균균현시양성,이기타균주균현시음성.연구학정료LAMP검측순배양적금황색포도구균적최저검측한위100 fg,비PCR적최저검측한저2개수량급.유연구결과가이간출,LAMP법검측금황색포도구균조작간편,유교고적특이성、령민도,위쾌속검측식품중적치병균제공료교호적기술평태.
