登革病毒1型E蛋白的原核细胞表达及多克隆抗体的制备
등혁병독1형E단백적원핵세포표체급다극륭항체적제비
Prokaryotic expression of E protein of dengue virus type 1 and preparation of polyclonal antibody
  • 万方数据
    国际检验医学杂志 국제검험의학잡지
    INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
    2013年 23期 3107-3109 ,共3页

    汪伟%丁显平%杨会强%李竹石%谭帅%赵宇%刘莉娜%谭昌耀%曾献武

    왕위%정현평%양회강%리죽석%담수%조우%류리나%담창요%증헌무

    登革病毒%原核细胞%抗体,多克隆%遗传载体 登革病毒%原覈細胞%抗體,多剋隆%遺傳載體
    등혁병독%원핵세포%항체,다극륭%유전재체
    目的 构建登革病毒1型(DENV-1)E蛋白的原核细胞表达载体并进行原核细胞表达,并制备其多克隆抗体.方法 利用聚合酶链反应(PCR)扩增DENV-1 E蛋白序列,经酶切后将其插入原核细胞表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32-D1-E.重组质粒转化E.Coli Rosetta(DE3)感受态细胞,目的 蛋白经异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,纯化后采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析蛋白表达情况,并用纯化后的表达蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗血清,用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)检测抗体的效价,Western blot检测抗体的特异性.结果 成功构建了pET-32-D1-E原核细胞表达重组质粒,DENV-1 E蛋白获得高效表达;纯化后的重组蛋白免疫家兔获得的特异性抗血清效价为1∶25 600,Western blot证实其特异性良好.结论 成功构建了DENV-1 E蛋白的原核细胞表达载体,并制备了可用于DENV快速检测的高效多克隆抗体.
    목적 구건등혁병독1형(DENV-1)E단백적원핵세포표체재체병진행원핵세포표체,병제비기다극륭항체.방법 이용취합매련반응(PCR)확증DENV-1 E단백서렬,경매절후장기삽입원핵세포표체재체pET-32a(+),구건중조질립pET-32-D1-E.중조질립전화E.Coli Rosetta(DE3)감수태세포,목적 단백경이병기-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,순화후채용십이완기류산납취병희선알응효전영(SDS-PAGE)초보분석단백표체정황,병용순화후적표체단백면역가토,제비해단백적다극륭항혈청,용간접매련면역흡부측정(ELISA)검측항체적효개,Western blot검측항체적특이성.결과 성공구건료pET-32-D1-E원핵세포표체중조질립,DENV-1 E단백획득고효표체;순화후적중조단백면역가토획득적특이성항혈청효개위1∶25 600,Western blot증실기특이성량호.결론 성공구건료DENV-1 E단백적원핵세포표체재체,병제비료가용우DENV쾌속검측적고효다극륭항체.
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