医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2013年
12期
19-22
,共4页
徐俊楠%何逸飞%王科嘉%朱晓彤%陈玉霞%刘志民%章卫平
徐俊楠%何逸飛%王科嘉%硃曉彤%陳玉霞%劉誌民%章衛平
서준남%하일비%왕과가%주효동%진옥하%류지민%장위평
重组腺病毒%表皮生长因子受体%原代肝细胞
重組腺病毒%錶皮生長因子受體%原代肝細胞
중조선병독%표피생장인자수체%원대간세포
Adenovirus%EGFR%Liver
目的 构建含表皮生长因子受体EGFR基因的重组腺病毒载体,并观察所构建腺病毒介导的EGFR过表达对其下游的AKT通路的激活.方法 将EGFR的cDNA片段克隆至pshuffle-CMV载体,将该载体与pAdEasy质粒进行细菌内同源重组从而获得重组腺病毒载体pAd-EGFR,之后在Ad293细胞中进行包装以及扩增,并对病毒效价进行检测;最后利用所制备的腺病毒Ad-EGFR感染小鼠原代肝细胞,利用蛋白印迹法Western blot检测EGFR在原代肝细胞中的表达及其对信号分子AKT的活化作用.结果 成功制备具有生物学活性的EGFR重组腺病毒,并观察到该重组腺病毒在Huh-7细胞介导EGFR的过表达以及在原代肝细胞中对EGFR下游PI3K-AKT通路的激活作用.结论 所构建的EGFR重组腺病毒载体可以介导细胞中EGFR的过表达并激活PI3K-AKT信号通路,为今后研究EGFR的相关生物学功能奠定了基础.
目的 構建含錶皮生長因子受體EGFR基因的重組腺病毒載體,併觀察所構建腺病毒介導的EGFR過錶達對其下遊的AKT通路的激活.方法 將EGFR的cDNA片段剋隆至pshuffle-CMV載體,將該載體與pAdEasy質粒進行細菌內同源重組從而穫得重組腺病毒載體pAd-EGFR,之後在Ad293細胞中進行包裝以及擴增,併對病毒效價進行檢測;最後利用所製備的腺病毒Ad-EGFR感染小鼠原代肝細胞,利用蛋白印跡法Western blot檢測EGFR在原代肝細胞中的錶達及其對信號分子AKT的活化作用.結果 成功製備具有生物學活性的EGFR重組腺病毒,併觀察到該重組腺病毒在Huh-7細胞介導EGFR的過錶達以及在原代肝細胞中對EGFR下遊PI3K-AKT通路的激活作用.結論 所構建的EGFR重組腺病毒載體可以介導細胞中EGFR的過錶達併激活PI3K-AKT信號通路,為今後研究EGFR的相關生物學功能奠定瞭基礎.
목적 구건함표피생장인자수체EGFR기인적중조선병독재체,병관찰소구건선병독개도적EGFR과표체대기하유적AKT통로적격활.방법 장EGFR적cDNA편단극륭지pshuffle-CMV재체,장해재체여pAdEasy질립진행세균내동원중조종이획득중조선병독재체pAd-EGFR,지후재Ad293세포중진행포장이급확증,병대병독효개진행검측;최후이용소제비적선병독Ad-EGFR감염소서원대간세포,이용단백인적법Western blot검측EGFR재원대간세포중적표체급기대신호분자AKT적활화작용.결과 성공제비구유생물학활성적EGFR중조선병독,병관찰도해중조선병독재Huh-7세포개도EGFR적과표체이급재원대간세포중대EGFR하유PI3K-AKT통로적격활작용.결론 소구건적EGFR중조선병독재체가이개도세포중EGFR적과표체병격활PI3K-AKT신호통로,위금후연구EGFR적상관생물학공능전정료기출.
