中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
12期
989-992
,共4页
解晓莉%徐正中%孟闯%单锋丽%单法%陈祥%焦新安
解曉莉%徐正中%孟闖%單鋒麗%單法%陳祥%焦新安
해효리%서정중%맹틈%단봉려%단법%진상%초신안
梅花鹿γ干扰素%单克隆抗体%夹心ELISA
梅花鹿γ榦擾素%單剋隆抗體%夾心ELISA
매화록γ간우소%단극륭항체%협심ELISA
cervine IFN-γ%monoclonal antibody%sandwich ELISA
为利用抗牛γ干扰素(BoIFN-γ)特异性单克隆抗体(MAb)建立检测梅花鹿γ干扰素(CerIFN-γ)的双抗体夹心ELISA检测方法,本研究通过RT-PCR方法从双阳型梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA中扩增出CerIFN-γcDNA,通过原核表达系统表达重组CerIFN-γ蛋白(rHis-CerIFN-γ);通过间接ELISA方法评价其与抗BoIFN-γMAb的反应性,筛选出与之反应最佳的两株MAb建立双抗体夹心ELISA检测方法.基因序列比对显示CerIFN-γ(JQ408441)与BoIFN-γ的同源性为95.6％,氨基酸序列的同源性为91.6％;SDS-PAGE检测结果显示CerIFN-γ在大肠杆菌BL21 (DE3)中获得高效可溶性表达,大小为23 ku;间接ELISA结果显示42株MAb中有15株与rHis-CerIFN-γ反应性较好,其中1C12和5E11两株抗体结合活性最高;采用MAb 1C12为捕获抗体,以生物素标记的MAb 5E11为检测抗体建立的用于检测CerIFN-γ的双抗体夹心ELISA方法可检出3.05 ng/100 μL的rHis-CerIFN-γ.本研究所建立的检测CerIFN-γ双抗体夹心ELISA方法,为进一步研究CerIFN-γ及相关疾病提供了实验手段.
為利用抗牛γ榦擾素(BoIFN-γ)特異性單剋隆抗體(MAb)建立檢測梅花鹿γ榦擾素(CerIFN-γ)的雙抗體夾心ELISA檢測方法,本研究通過RT-PCR方法從雙暘型梅花鹿外週血淋巴細胞總RNA中擴增齣CerIFN-γcDNA,通過原覈錶達繫統錶達重組CerIFN-γ蛋白(rHis-CerIFN-γ);通過間接ELISA方法評價其與抗BoIFN-γMAb的反應性,篩選齣與之反應最佳的兩株MAb建立雙抗體夾心ELISA檢測方法.基因序列比對顯示CerIFN-γ(JQ408441)與BoIFN-γ的同源性為95.6％,氨基痠序列的同源性為91.6％;SDS-PAGE檢測結果顯示CerIFN-γ在大腸桿菌BL21 (DE3)中穫得高效可溶性錶達,大小為23 ku;間接ELISA結果顯示42株MAb中有15株與rHis-CerIFN-γ反應性較好,其中1C12和5E11兩株抗體結閤活性最高;採用MAb 1C12為捕穫抗體,以生物素標記的MAb 5E11為檢測抗體建立的用于檢測CerIFN-γ的雙抗體夾心ELISA方法可檢齣3.05 ng/100 μL的rHis-CerIFN-γ.本研究所建立的檢測CerIFN-γ雙抗體夾心ELISA方法,為進一步研究CerIFN-γ及相關疾病提供瞭實驗手段.
위이용항우γ간우소(BoIFN-γ)특이성단극륭항체(MAb)건립검측매화록γ간우소(CerIFN-γ)적쌍항체협심ELISA검측방법,본연구통과RT-PCR방법종쌍양형매화록외주혈림파세포총RNA중확증출CerIFN-γcDNA,통과원핵표체계통표체중조CerIFN-γ단백(rHis-CerIFN-γ);통과간접ELISA방법평개기여항BoIFN-γMAb적반응성,사선출여지반응최가적량주MAb건립쌍항체협심ELISA검측방법.기인서렬비대현시CerIFN-γ(JQ408441)여BoIFN-γ적동원성위95.6％,안기산서렬적동원성위91.6％;SDS-PAGE검측결과현시CerIFN-γ재대장간균BL21 (DE3)중획득고효가용성표체,대소위23 ku;간접ELISA결과현시42주MAb중유15주여rHis-CerIFN-γ반응성교호,기중1C12화5E11량주항체결합활성최고;채용MAb 1C12위포획항체,이생물소표기적MAb 5E11위검측항체건립적용우검측CerIFN-γ적쌍항체협심ELISA방법가검출3.05 ng/100 μL적rHis-CerIFN-γ.본연구소건립적검측CerIFN-γ쌍항체협심ELISA방법,위진일보연구CerIFN-γ급상관질병제공료실험수단.
