CAJ | 학술논문

目的：探讨难转染悬浮细胞慢病毒过表达稳定细胞株的构建方法。方法选用人弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞株OCI-LY8为研究对象，分别用Fbw7基因的慢病毒原液、慢病毒浓缩液、慢病毒浓缩液加入终浓度为5μg/mL的1，5-二甲基-1，5-二氮十一亚甲基聚甲溴化物（polybrene）、慢病毒浓缩液加入终浓度为10μg/mL的polybrene 4种方式进行感染。因慢病毒载体含有绿色荧光蛋白报告基因，故通过倒置荧光显微镜观察细胞内荧光的数量及强度来评判上述4种方式的感染效率，并用Real-time PCR和Western blot进行验证。结果慢病毒原液的感染效率极低，仅在少许细胞中看到极微弱的荧光；慢病毒浓缩液的感染效率尚可，约有60％的细胞可以观察到微弱的荧光；慢病毒浓缩液中加入5μg/mL polybrene的感染效率较高，约90％的细胞可以观察到较强的荧光；慢病毒浓缩液中加入10μg/mL polybrene的感染效率极高，几乎全部细胞均可以观察到很强的荧光。结论慢病毒浓缩液中加入合适浓度的polybrene是感染DLBCL细胞株OCI-LY8较为有效的方法。慢病毒的感染效率与细胞的状态、感染复数、polybrene的浓度密切相关。
목적：탐토난전염현부세포만병독과표체은정세포주적구건방법。방법선용인미만성대B세포림파류（DLBCL）세포주OCI-LY8위연구대상，분별용Fbw7기인적만병독원액、만병독농축액、만병독농축액가입종농도위5μg/mL적1，5-이갑기-1，5-이담십일아갑기취갑추화물（polybrene）、만병독농축액가입종농도위10μg/mL적polybrene 4충방식진행감염。인만병독재체함유록색형광단백보고기인，고통과도치형광현미경관찰세포내형광적수량급강도래평판상술4충방식적감염효솔，병용Real-time PCR화Western blot진행험증。결과만병독원액적감염효솔겁저，부재소허세포중간도겁미약적형광；만병독농축액적감염효솔상가，약유60％적세포가이관찰도미약적형광；만병독농축액중가입5μg/mL polybrene적감염효솔교고，약90％적세포가이관찰도교강적형광；만병독농축액중가입10μg/mL polybrene적감염효솔겁고，궤호전부세포균가이관찰도흔강적형광。결론만병독농축액중가입합괄농도적polybrene시감염DLBCL세포주OCI-LY8교위유효적방법。만병독적감염효솔여세포적상태、감염복수、polybrene적농도밀절상관。