西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2014年
1期
132-135,138
,共5页
石婕%邓永宁%刘洁%屈秋民
石婕%鄧永寧%劉潔%屈鞦民
석첩%산영저%류길%굴추민
泛素-蛋白酶系统%尼古丁%鱼藤酮%帕金森病
汎素-蛋白酶繫統%尼古丁%魚籐酮%帕金森病
범소-단백매계통%니고정%어등동%파금삼병
目的 建立一种动态检测泛素-蛋白酶系统(UPS)活性的新方法,并利用此方法观察尼古丁对鱼藤酮诱导的UPS功能障碍的影响.方法 合成UPS降解信号CL1,将其与含有绿色荧光蛋白的质粒pEGFP-C1连接,构建CL1-pEGFP-C1质粒并转染PC12细胞,经G418筛选后得到稳定表达的CL1-pEGFP-C1细胞系.蛋白酶抑制剂MG132、鱼藤酮或尼古丁+鱼藤酮处理细胞,应用免疫印迹技术检测细胞内GFP含量的变化,荧光显微镜观察细胞荧光强度的变化.结果 稳定转染的CL1-pEGFP-C1细胞无绿色荧光,而MG132处理后细胞内绿色荧光显著增加,且随MG132浓度增加荧光强度逐渐增加,GFP表达逐渐增高(P<0.05).鱼藤酮处理后细胞内绿色荧光显著增加,GFP含量明显高于非处理组(P<0.05).低浓度尼古丁处理组细胞内荧光强度显著降低,GFP蛋白表达显著减少,高浓度尼古丁处理组细胞内荧光强度降低更加显著,GFP蛋白表达减少更明显(P<0.05).结论 成功建立了能够在活细胞中全面、动态检测UPS活性的方法.鱼藤酮可降低UPS活性,尼古丁可减轻鱼藤酮引起的UPS功能障碍.
目的 建立一種動態檢測汎素-蛋白酶繫統(UPS)活性的新方法,併利用此方法觀察尼古丁對魚籐酮誘導的UPS功能障礙的影響.方法 閤成UPS降解信號CL1,將其與含有綠色熒光蛋白的質粒pEGFP-C1連接,構建CL1-pEGFP-C1質粒併轉染PC12細胞,經G418篩選後得到穩定錶達的CL1-pEGFP-C1細胞繫.蛋白酶抑製劑MG132、魚籐酮或尼古丁+魚籐酮處理細胞,應用免疫印跡技術檢測細胞內GFP含量的變化,熒光顯微鏡觀察細胞熒光彊度的變化.結果 穩定轉染的CL1-pEGFP-C1細胞無綠色熒光,而MG132處理後細胞內綠色熒光顯著增加,且隨MG132濃度增加熒光彊度逐漸增加,GFP錶達逐漸增高(P<0.05).魚籐酮處理後細胞內綠色熒光顯著增加,GFP含量明顯高于非處理組(P<0.05).低濃度尼古丁處理組細胞內熒光彊度顯著降低,GFP蛋白錶達顯著減少,高濃度尼古丁處理組細胞內熒光彊度降低更加顯著,GFP蛋白錶達減少更明顯(P<0.05).結論 成功建立瞭能夠在活細胞中全麵、動態檢測UPS活性的方法.魚籐酮可降低UPS活性,尼古丁可減輕魚籐酮引起的UPS功能障礙.
목적 건립일충동태검측범소-단백매계통(UPS)활성적신방법,병이용차방법관찰니고정대어등동유도적UPS공능장애적영향.방법 합성UPS강해신호CL1,장기여함유록색형광단백적질립pEGFP-C1련접,구건CL1-pEGFP-C1질립병전염PC12세포,경G418사선후득도은정표체적CL1-pEGFP-C1세포계.단백매억제제MG132、어등동혹니고정+어등동처리세포,응용면역인적기술검측세포내GFP함량적변화,형광현미경관찰세포형광강도적변화.결과 은정전염적CL1-pEGFP-C1세포무록색형광,이MG132처리후세포내록색형광현저증가,차수MG132농도증가형광강도축점증가,GFP표체축점증고(P<0.05).어등동처리후세포내록색형광현저증가,GFP함량명현고우비처리조(P<0.05).저농도니고정처리조세포내형광강도현저강저,GFP단백표체현저감소,고농도니고정처리조세포내형광강도강저경가현저,GFP단백표체감소경명현(P<0.05).결론 성공건립료능구재활세포중전면、동태검측UPS활성적방법.어등동가강저UPS활성,니고정가감경어등동인기적UPS공능장애.
