西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2014年
1期
6-11
,共6页
刘波%孙泽强%刘庆勇%陈杰%王司军%杨广笑%王全颖
劉波%孫澤彊%劉慶勇%陳傑%王司軍%楊廣笑%王全穎
류파%손택강%류경용%진걸%왕사군%양엄소%왕전영
融合蛋白%G250%HBcAg%免疫原性%肾癌
融閤蛋白%G250%HBcAg%免疫原性%腎癌
융합단백%G250%HBcAg%면역원성%신암
目的 构建肾癌G250抗原肽与HBcAg重组基因的原核表达质粒pET28a(+)/C-G250肽-C,并通过大肠杆菌进行原核表达并纯化,分析表达融合蛋白的免疫原性及抗原性.方法 PCR扩增编码G250抗原中249～268氨基酸的基因片段,将G250肽插入去除主要免疫优势区的重组质粒pGEMEX/HBcAg中,获得重组质粒pGEMEX/C-G250肽-C,为更换酶切位点,以pGEMEX/C-G250肽-C为模板,PCR扩增C-G250肽-C基因片段,最终将目的基因亚克隆入原核表达质粒pET28a(+)中,IPTG诱导融合蛋白表达,利用Ni2+-NTA亲和层析法纯化重组融合蛋白,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达,纯化后融合蛋白经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗体的滴度.结果 酶切及基因测序鉴定证实融合基因正确重组于表达质粒pET28a(+)中,原核表达并纯化后,该分离纯化融合蛋白纯度达95%以上,其相对分子质量约为22.35.BALB/c小鼠经4次免疫后,所有小鼠血清中均可检测到抗体,免疫第6周其血清中抗体滴度可达到1:5.12×105,抗G250肽抗体滴度达到1:6.4×104,抗HBcAg抗体滴度不超过1:4×103.结论 成功构建肾癌G250抗原肽与HBcAg重组基因原核表达质粒pET28a(+)/C-G250肽-C,在大肠杆菌中可高效表达,纯化后融合蛋白具有较强的免疫原性,能诱导小鼠产生高滴度和高特异性的抗体.
目的 構建腎癌G250抗原肽與HBcAg重組基因的原覈錶達質粒pET28a(+)/C-G250肽-C,併通過大腸桿菌進行原覈錶達併純化,分析錶達融閤蛋白的免疫原性及抗原性.方法 PCR擴增編碼G250抗原中249～268氨基痠的基因片段,將G250肽插入去除主要免疫優勢區的重組質粒pGEMEX/HBcAg中,穫得重組質粒pGEMEX/C-G250肽-C,為更換酶切位點,以pGEMEX/C-G250肽-C為模闆,PCR擴增C-G250肽-C基因片段,最終將目的基因亞剋隆入原覈錶達質粒pET28a(+)中,IPTG誘導融閤蛋白錶達,利用Ni2+-NTA親和層析法純化重組融閤蛋白,SDS-PAGE鑒定融閤蛋白的錶達,純化後融閤蛋白經腹腔註射免疫BALB/c小鼠,間接ELISA法檢測小鼠血清中抗體的滴度.結果 酶切及基因測序鑒定證實融閤基因正確重組于錶達質粒pET28a(+)中,原覈錶達併純化後,該分離純化融閤蛋白純度達95%以上,其相對分子質量約為22.35.BALB/c小鼠經4次免疫後,所有小鼠血清中均可檢測到抗體,免疫第6週其血清中抗體滴度可達到1:5.12×105,抗G250肽抗體滴度達到1:6.4×104,抗HBcAg抗體滴度不超過1:4×103.結論 成功構建腎癌G250抗原肽與HBcAg重組基因原覈錶達質粒pET28a(+)/C-G250肽-C,在大腸桿菌中可高效錶達,純化後融閤蛋白具有較彊的免疫原性,能誘導小鼠產生高滴度和高特異性的抗體.
목적 구건신암G250항원태여HBcAg중조기인적원핵표체질립pET28a(+)/C-G250태-C,병통과대장간균진행원핵표체병순화,분석표체융합단백적면역원성급항원성.방법 PCR확증편마G250항원중249～268안기산적기인편단,장G250태삽입거제주요면역우세구적중조질립pGEMEX/HBcAg중,획득중조질립pGEMEX/C-G250태-C,위경환매절위점,이pGEMEX/C-G250태-C위모판,PCR확증C-G250태-C기인편단,최종장목적기인아극륭입원핵표체질립pET28a(+)중,IPTG유도융합단백표체,이용Ni2+-NTA친화층석법순화중조융합단백,SDS-PAGE감정융합단백적표체,순화후융합단백경복강주사면역BALB/c소서,간접ELISA법검측소서혈청중항체적적도.결과 매절급기인측서감정증실융합기인정학중조우표체질립pET28a(+)중,원핵표체병순화후,해분리순화융합단백순도체95%이상,기상대분자질량약위22.35.BALB/c소서경4차면역후,소유소서혈청중균가검측도항체,면역제6주기혈청중항체적도가체도1:5.12×105,항G250태항체적도체도1:6.4×104,항HBcAg항체적도불초과1:4×103.결론 성공구건신암G250항원태여HBcAg중조기인원핵표체질립pET28a(+)/C-G250태-C,재대장간균중가고효표체,순화후융합단백구유교강적면역원성,능유도소서산생고적도화고특이성적항체.
