解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2013年
6期
865-868
,共4页
卜旺雨%齐义军%魏华%张娟%马瑾%王明%马远方
蔔旺雨%齊義軍%魏華%張娟%馬瑾%王明%馬遠方
복왕우%제의군%위화%장연%마근%왕명%마원방
食管%蛋白样品制备%蛋白质组%蛋白沉淀%超滤%二维电泳
食管%蛋白樣品製備%蛋白質組%蛋白沉澱%超濾%二維電泳
식관%단백양품제비%단백질조%단백침정%초려%이유전영
Esophagus%Protein preparation%Proteomics%Protein precipitation%Ultracentrifugation%Two-dimensional electrophoresis
目的 探讨超滤法和7种不同沉淀方法纯化含PBS的蛋白样品对蛋白凝胶电泳的影响.方法 应用超滤法和7种沉淀方法[包括硫酸铵、氯仿甲醇、酸化丙酮甲醇、乙醇、丙酮、三氯乙酸(TCA)、TCA/丙酮]纯化PBS稀释的混合食管癌组织蛋白(10例),二喹啉甲酸(BCA)、Bradford及2D法测定蛋白浓度并进行一维和二维聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳,Image Master软件分析二维电泳图谱蛋白点.结果 Bradford法和2D法适用于二维电泳水化液溶解的蛋白样品浓度测定.超滤法和硫酸铵沉淀法的蛋白回收率分别为40％和4％,其他方法的蛋白回收率约为22％.丙酮沉淀法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点边界清晰、分辨率高且数目最多;其次是乙醇沉淀和氯仿甲醇沉淀法;再其次是超滤法,该法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点表现不同程度的弥散;酸化丙酮甲醇沉淀蛋白的二维电泳图谱中蛋白点丢失最多.结论 丙酮沉淀法适用于原始浓度高、体积小的蛋白样品除盐及浓缩,超滤法是原始体积较大、浓度较低蛋白样品浓缩纯化的首选方法.
目的 探討超濾法和7種不同沉澱方法純化含PBS的蛋白樣品對蛋白凝膠電泳的影響.方法 應用超濾法和7種沉澱方法[包括硫痠銨、氯倣甲醇、痠化丙酮甲醇、乙醇、丙酮、三氯乙痠(TCA)、TCA/丙酮]純化PBS稀釋的混閤食管癌組織蛋白(10例),二喹啉甲痠(BCA)、Bradford及2D法測定蛋白濃度併進行一維和二維聚丙烯酰胺凝膠蛋白電泳,Image Master軟件分析二維電泳圖譜蛋白點.結果 Bradford法和2D法適用于二維電泳水化液溶解的蛋白樣品濃度測定.超濾法和硫痠銨沉澱法的蛋白迴收率分彆為40％和4％,其他方法的蛋白迴收率約為22％.丙酮沉澱法純化蛋白的二維電泳圖譜蛋白點邊界清晰、分辨率高且數目最多;其次是乙醇沉澱和氯倣甲醇沉澱法;再其次是超濾法,該法純化蛋白的二維電泳圖譜蛋白點錶現不同程度的瀰散;痠化丙酮甲醇沉澱蛋白的二維電泳圖譜中蛋白點丟失最多.結論 丙酮沉澱法適用于原始濃度高、體積小的蛋白樣品除鹽及濃縮,超濾法是原始體積較大、濃度較低蛋白樣品濃縮純化的首選方法.
목적 탐토초려법화7충불동침정방법순화함PBS적단백양품대단백응효전영적영향.방법 응용초려법화7충침정방법[포괄류산안、록방갑순、산화병동갑순、을순、병동、삼록을산(TCA)、TCA/병동]순화PBS희석적혼합식관암조직단백(10례),이규람갑산(BCA)、Bradford급2D법측정단백농도병진행일유화이유취병희선알응효단백전영,Image Master연건분석이유전영도보단백점.결과 Bradford법화2D법괄용우이유전영수화액용해적단백양품농도측정.초려법화류산안침정법적단백회수솔분별위40％화4％,기타방법적단백회수솔약위22％.병동침정법순화단백적이유전영도보단백점변계청석、분변솔고차수목최다;기차시을순침정화록방갑순침정법;재기차시초려법,해법순화단백적이유전영도보단백점표현불동정도적미산;산화병동갑순침정단백적이유전영도보중단백점주실최다.결론 병동침정법괄용우원시농도고、체적소적단백양품제염급농축,초려법시원시체적교대、농도교저단백양품농축순화적수선방법.
