解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2013年
6期
772-777
,共6页
董越娟%石贞玉%刘诗濛%张维娟%皇甫超申%邓锦波%刘彬
董越娟%石貞玉%劉詩濛%張維娟%皇甫超申%鄧錦波%劉彬
동월연%석정옥%류시몽%장유연%황보초신%산금파%류빈
酒精%自噬%LC3%P62%PC12细胞%间接免疫荧光法%透射电镜
酒精%自噬%LC3%P62%PC12細胞%間接免疫熒光法%透射電鏡
주정%자서%LC3%P62%PC12세포%간접면역형광법%투사전경
Ethanol%Autophagy%LC3%P62%PC12 cell%Indirect immunofluorescence%Transmission electron microscopy
目的 采用不同浓度酒精作用于大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞,观察细胞自噬发生及其与P62变化的关系.方法 用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察酒精对PC12细胞生存率的影响;间接免疫荧光法检测细胞自噬标志性蛋白LC3和P62的变化;高内涵活细胞成像系统检测细胞LC3荧光强度;透射电镜检测细胞自噬的超微结构;Western blotting方法检测P62蛋白量的表达.结果 50～800mmol/L浓度酒精对PC12细胞的增殖有显著的抑制作用,呈浓度依赖性.酒精致PC12细胞自噬标志性蛋白LC3在细胞核周围密度增高,并与P62形成点状聚集共定位,其中在200mmol/L浓度酒精作用2h,PC12细胞LC3自噬荧光强度最高;透射电镜也观察到酒精作用的PC12细胞质中自噬体和自噬溶酶体.Western blotting结果显示,不同浓度酒精处理PC12细胞2h,P62蛋白表达量显著增加(P＜0.01);用200mmol/L浓度酒精处理PC12细胞,P62蛋白表达在2h达到最高值.结论 酒精诱导PC12细胞的自噬作用,P62蛋白参与自噬调控过程.
目的 採用不同濃度酒精作用于大鼠嗜鉻細胞瘤(PC12)細胞,觀察細胞自噬髮生及其與P62變化的關繫.方法 用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)觀察酒精對PC12細胞生存率的影響;間接免疫熒光法檢測細胞自噬標誌性蛋白LC3和P62的變化;高內涵活細胞成像繫統檢測細胞LC3熒光彊度;透射電鏡檢測細胞自噬的超微結構;Western blotting方法檢測P62蛋白量的錶達.結果 50～800mmol/L濃度酒精對PC12細胞的增殖有顯著的抑製作用,呈濃度依賴性.酒精緻PC12細胞自噬標誌性蛋白LC3在細胞覈週圍密度增高,併與P62形成點狀聚集共定位,其中在200mmol/L濃度酒精作用2h,PC12細胞LC3自噬熒光彊度最高;透射電鏡也觀察到酒精作用的PC12細胞質中自噬體和自噬溶酶體.Western blotting結果顯示,不同濃度酒精處理PC12細胞2h,P62蛋白錶達量顯著增加(P＜0.01);用200mmol/L濃度酒精處理PC12細胞,P62蛋白錶達在2h達到最高值.結論 酒精誘導PC12細胞的自噬作用,P62蛋白參與自噬調控過程.
목적 채용불동농도주정작용우대서기락세포류(PC12)세포,관찰세포자서발생급기여P62변화적관계.방법 용사갑기우담서염비색법(MTT)관찰주정대PC12세포생존솔적영향;간접면역형광법검측세포자서표지성단백LC3화P62적변화;고내함활세포성상계통검측세포LC3형광강도;투사전경검측세포자서적초미결구;Western blotting방법검측P62단백량적표체.결과 50～800mmol/L농도주정대PC12세포적증식유현저적억제작용,정농도의뢰성.주정치PC12세포자서표지성단백LC3재세포핵주위밀도증고,병여P62형성점상취집공정위,기중재200mmol/L농도주정작용2h,PC12세포LC3자서형광강도최고;투사전경야관찰도주정작용적PC12세포질중자서체화자서용매체.Western blotting결과현시,불동농도주정처리PC12세포2h,P62단백표체량현저증가(P＜0.01);용200mmol/L농도주정처리PC12세포,P62단백표체재2h체도최고치.결론 주정유도PC12세포적자서작용,P62단백삼여자서조공과정.
