畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
10期
1629-1636
,共8页
张永宁%吴绍强%吕继洲%冯春燕%王彩霞%袁向芬%邓俊花%林祥梅%Wernike Kerstin
張永寧%吳紹彊%呂繼洲%馮春燕%王綵霞%袁嚮芬%鄧俊花%林祥梅%Wernike Kerstin
장영저%오소강%려계주%풍춘연%왕채하%원향분%산준화%림상매%Wernike Kerstin
施马伦贝格病毒%核衣壳蛋白%原核表达%多克隆抗体%免疫亲和层析
施馬倫貝格病毒%覈衣殼蛋白%原覈錶達%多剋隆抗體%免疫親和層析
시마륜패격병독%핵의각단백%원핵표체%다극륭항체%면역친화층석
Schmallenberg virus (SBV)%nucleocapsid (N) protein%prokaryotic expression%poly clonal antibodies%immunoaffinity chromatography
本研究旨在表达施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的核衣壳蛋白(N),进而制备其多克隆抗体.以SBV(BH80株)的RNA为模板,RT-PCR扩增N基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-28a-c(+)中,获得pET-28a-SBV-N重组质粒.经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达His-SBV-N融合蛋白.在非变性条件下用Ni NTA柱纯化His-SBV-N,并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多抗.经免疫亲和层析纯化后,利用Western blot和间接免疫荧光对多抗进行鉴定.结果表明:(1)His-SBV-N融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中同时以可溶性和包涵体2种形式表达,相对分子质量约为30 ku; (2)制备的多抗效价高达1:64 000.该多抗不仅能与His-SBV-N融合蛋白发生特异性反应,而且还能识别SBV的不同毒株,但与布尼亚病毒科内亲缘关系最近的沙门达病毒(Shamonda virus)、道格拉斯病毒(Douglas virus)和赤羽病病毒(Akabane virus)的核衣壳蛋白存在交叉反应.His-SBV-N融合蛋白及其多抗的成功制备,为施马伦贝格病血清学检测方法的建立奠定了物质基础.
本研究旨在錶達施馬倫貝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的覈衣殼蛋白(N),進而製備其多剋隆抗體.以SBV(BH80株)的RNA為模闆,RT-PCR擴增N基因序列,併將其剋隆至原覈錶達載體pET-28a-c(+)中,穫得pET-28a-SBV-N重組質粒.經酶切和測序鑒定後,將重組質粒轉化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導錶達His-SBV-N融閤蛋白.在非變性條件下用Ni NTA柱純化His-SBV-N,併以此為抗原免疫新西蘭大白兔製備多抗.經免疫親和層析純化後,利用Western blot和間接免疫熒光對多抗進行鑒定.結果錶明:(1)His-SBV-N融閤蛋白在E.coli BL21(DE3)中同時以可溶性和包涵體2種形式錶達,相對分子質量約為30 ku; (2)製備的多抗效價高達1:64 000.該多抗不僅能與His-SBV-N融閤蛋白髮生特異性反應,而且還能識彆SBV的不同毒株,但與佈尼亞病毒科內親緣關繫最近的沙門達病毒(Shamonda virus)、道格拉斯病毒(Douglas virus)和赤羽病病毒(Akabane virus)的覈衣殼蛋白存在交扠反應.His-SBV-N融閤蛋白及其多抗的成功製備,為施馬倫貝格病血清學檢測方法的建立奠定瞭物質基礎.
본연구지재표체시마륜패격병독(Schmallenberg virus,SBV)적핵의각단백(N),진이제비기다극륭항체.이SBV(BH80주)적RNA위모판,RT-PCR확증N기인서렬,병장기극륭지원핵표체재체pET-28a-c(+)중,획득pET-28a-SBV-N중조질립.경매절화측서감정후,장중조질립전화E.coli BL21(DE3),IPTG유도표체His-SBV-N융합단백.재비변성조건하용Ni NTA주순화His-SBV-N,병이차위항원면역신서란대백토제비다항.경면역친화층석순화후,이용Western blot화간접면역형광대다항진행감정.결과표명:(1)His-SBV-N융합단백재E.coli BL21(DE3)중동시이가용성화포함체2충형식표체,상대분자질량약위30 ku; (2)제비적다항효개고체1:64 000.해다항불부능여His-SBV-N융합단백발생특이성반응,이차환능식별SBV적불동독주,단여포니아병독과내친연관계최근적사문체병독(Shamonda virus)、도격랍사병독(Douglas virus)화적우병병독(Akabane virus)적핵의각단백존재교차반응.His-SBV-N융합단백급기다항적성공제비,위시마륜패격병혈청학검측방법적건립전정료물질기출.
