畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
10期
1622-1628
,共7页
白昀%王海燕%王占伟%纪燕%吴叙苏%刘冬霞%邵国青
白昀%王海燕%王佔偉%紀燕%吳敘囌%劉鼕霞%邵國青
백윤%왕해연%왕점위%기연%오서소%류동하%소국청
岗地弓形虫%MIC3蛋白%单克隆抗体%胶体金
崗地弓形蟲%MIC3蛋白%單剋隆抗體%膠體金
강지궁형충%MIC3단백%단극륭항체%효체금
Toxoplasma gondii%protein MIC3%monoclonal antibody%colloidal gold
为获得针对猪弓形虫MIC3蛋白的单克隆抗体,为进一步研制免疫金标试纸条提供材料,作者以纯化的重组MIC3蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体(McAb).经ELISA筛选阳性克隆和亚克隆建株,体内诱生腹水法制备McAb,测定其亚类、效价,进行Western blot分析,并利用胶体金颗粒标记的McAb制备免疫金标试纸条.成功制备了2株稳定分泌抗MIC3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株B7和D3,2株McAb的免疫球蛋白亚类均为IgG2a,其ELISA腹水效价分别为1∶64万和1∶192万,Western blot结果表明,2株McAbs腹水均能分别与纯化的重组MIC3蛋白和猪弓形虫全虫蛋白中大小为56和38 ku左右的蛋白发生特异性反应;用纯化后McAb标记的胶体金颗粒制备的免疫金标试纸条可以检测到最低浓度为4×104 CFU·mL-1的弓形虫速殖子.本研究为猪弓形虫病的现场诊断提供了有效的方法,显示出很好的临床应用前景.
為穫得針對豬弓形蟲MIC3蛋白的單剋隆抗體,為進一步研製免疫金標試紙條提供材料,作者以純化的重組MIC3蛋白免疫BALB/c小鼠,運用雜交瘤技術製備單剋隆抗體(McAb).經ELISA篩選暘性剋隆和亞剋隆建株,體內誘生腹水法製備McAb,測定其亞類、效價,進行Western blot分析,併利用膠體金顆粒標記的McAb製備免疫金標試紙條.成功製備瞭2株穩定分泌抗MIC3蛋白單剋隆抗體的雜交瘤細胞株B7和D3,2株McAb的免疫毬蛋白亞類均為IgG2a,其ELISA腹水效價分彆為1∶64萬和1∶192萬,Western blot結果錶明,2株McAbs腹水均能分彆與純化的重組MIC3蛋白和豬弓形蟲全蟲蛋白中大小為56和38 ku左右的蛋白髮生特異性反應;用純化後McAb標記的膠體金顆粒製備的免疫金標試紙條可以檢測到最低濃度為4×104 CFU·mL-1的弓形蟲速殖子.本研究為豬弓形蟲病的現場診斷提供瞭有效的方法,顯示齣很好的臨床應用前景.
위획득침대저궁형충MIC3단백적단극륭항체,위진일보연제면역금표시지조제공재료,작자이순화적중조MIC3단백면역BALB/c소서,운용잡교류기술제비단극륭항체(McAb).경ELISA사선양성극륭화아극륭건주,체내유생복수법제비McAb,측정기아류、효개,진행Western blot분석,병이용효체금과립표기적McAb제비면역금표시지조.성공제비료2주은정분비항MIC3단백단극륭항체적잡교류세포주B7화D3,2주McAb적면역구단백아류균위IgG2a,기ELISA복수효개분별위1∶64만화1∶192만,Western blot결과표명,2주McAbs복수균능분별여순화적중조MIC3단백화저궁형충전충단백중대소위56화38 ku좌우적단백발생특이성반응;용순화후McAb표기적효체금과립제비적면역금표시지조가이검측도최저농도위4×104 CFU·mL-1적궁형충속식자.본연구위저궁형충병적현장진단제공료유효적방법,현시출흔호적림상응용전경.
