CAJ | 학술논문

为探讨中国猪群中是否存在巴尔通体感染情况,作者将汉赛巴尔通体17-kDa蛋白基因按大肠杆菌密码子偏嗜性改造后进行全基因人工合成,然后将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-17kDa,导入大肠杆菌BL21感受态细胞中,进行诱导表达,并用Ni-NTA纯化试剂进行纯化;纯化后的蛋白应用His单抗进行鉴定.以17-kDa蛋白作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立检测抗汉赛巴尔通体17-kDa蛋白抗体的间接ELISA方法.结果如下:抗原包被量0.4 μg·mL1,37℃包被2h后4℃过夜,1％BSA 37℃封闭3h,待检血清1∶100稀释后,37℃孵育1h,二抗1∶15 000稀释,37℃作用30 min,抗体临界值OD450nm≥0.392判为阳性,OD400nm≤0.332 6判为阴性,介于二者之间为可疑.建立的ELISA与猪嗜血支原体、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪口蹄疫病毒等感染血清无交叉反应,批间和批内重复性较好,对379份血清样品进行检测,抗体阳性检出率达51.72％.该方法可用于汉赛巴尔通体抗体检测和流行病学调查.
위탐토중국저군중시부존재파이통체감염정황,작자장한새파이통체17-kDa단백기인안대장간균밀마자편기성개조후진행전기인인공합성,연후장목적기인극륭도원핵표체재체pET-28a중,구건중조질립pET-28a-17kDa,도입대장간균BL21감수태세포중,진행유도표체,병용Ni-NTA순화시제진행순화;순화후적단백응용His단항진행감정.이17-kDa단백작위포피항원,우화ELISA반응조건,건립검측항한새파이통체17-kDa단백항체적간접ELISA방법.결과여하:항원포피량0.4 μg·mL1,37℃포피2h후4℃과야,1％BSA 37℃봉폐3h,대검혈청1∶100희석후,37℃부육1h,이항1∶15 000희석,37℃작용30 min,항체림계치OD450nm≥0.392판위양성,OD400nm≤0.332 6판위음성,개우이자지간위가의.건립적ELISA여저기혈지원체、저번식여호흡종합정병독、저원배병독2형、저온병독、저위광견병병독、저구제역병독등감염혈청무교차반응,비간화비내중복성교호,대379빈혈청양품진행검측,항체양성검출솔체51.72％.해방법가용우한새파이통체항체검측화류행병학조사.