畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2013年
10期
1554-1560
,共7页
孔群芳%罗奋华%萨初拉%包佳婧%刘代艳%吴应积
孔群芳%囉奮華%薩初拉%包佳婧%劉代豔%吳應積
공군방%라강화%살초랍%포가청%류대염%오응적
山羊%睾丸%精原干细胞%分离纯化%免疫荧光染色
山羊%睪汍%精原榦細胞%分離純化%免疫熒光染色
산양%고환%정원간세포%분리순화%면역형광염색
goat%testis%spermatogonial stem cells%isolation and purification%immunofluorescence staining
旨在探究1种简便高效分离纯化山羊精原干细胞的方法.采用三步酶消化对4月龄的山羊睾丸进行处理,分离获得单细胞悬液.将细胞依次培养于明胶、大鼠鼠尾胶原和层粘连蛋白涂层的细胞培养皿中,根据各类细胞贴壁能力和贴壁速度不同进行精原干细胞的富集和纯化,并在各步纯化过程中用精原干细胞特异标记分子PLZF和CDH1进行免疫荧光标记染色鉴定,统计精原干细胞所占的比率,并对获得的细胞进行初步培养和鉴定.每克睾丸中分离出1.36×107个细胞.纯化后每克睾丸组织获得8.7×104个细胞,其中精原干细胞纯度达87.0％.将分离纯化后的细胞在体外培养可形成细胞簇,并表达精原干细胞标记分子CDH1和PLZF.结果表明,通过三步酶消化和差异贴壁方法已经建立起山羊精原干细胞的分离纯化技术.用此技术纯化的山羊精原干细胞(SSCs)能在体外培养增殖,形成细胞簇.
旨在探究1種簡便高效分離純化山羊精原榦細胞的方法.採用三步酶消化對4月齡的山羊睪汍進行處理,分離穫得單細胞懸液.將細胞依次培養于明膠、大鼠鼠尾膠原和層粘連蛋白塗層的細胞培養皿中,根據各類細胞貼壁能力和貼壁速度不同進行精原榦細胞的富集和純化,併在各步純化過程中用精原榦細胞特異標記分子PLZF和CDH1進行免疫熒光標記染色鑒定,統計精原榦細胞所佔的比率,併對穫得的細胞進行初步培養和鑒定.每剋睪汍中分離齣1.36×107箇細胞.純化後每剋睪汍組織穫得8.7×104箇細胞,其中精原榦細胞純度達87.0％.將分離純化後的細胞在體外培養可形成細胞簇,併錶達精原榦細胞標記分子CDH1和PLZF.結果錶明,通過三步酶消化和差異貼壁方法已經建立起山羊精原榦細胞的分離純化技術.用此技術純化的山羊精原榦細胞(SSCs)能在體外培養增殖,形成細胞簇.
지재탐구1충간편고효분리순화산양정원간세포적방법.채용삼보매소화대4월령적산양고환진행처리,분리획득단세포현액.장세포의차배양우명효、대서서미효원화층점련단백도층적세포배양명중,근거각류세포첩벽능력화첩벽속도불동진행정원간세포적부집화순화,병재각보순화과정중용정원간세포특이표기분자PLZF화CDH1진행면역형광표기염색감정,통계정원간세포소점적비솔,병대획득적세포진행초보배양화감정.매극고환중분리출1.36×107개세포.순화후매극고환조직획득8.7×104개세포,기중정원간세포순도체87.0％.장분리순화후적세포재체외배양가형성세포족,병표체정원간세포표기분자CDH1화PLZF.결과표명,통과삼보매소화화차이첩벽방법이경건립기산양정원간세포적분리순화기술.용차기술순화적산양정원간세포(SSCs)능재체외배양증식,형성세포족.
