CAJ | 학술논문

本研究旨在克隆猪Cdk2基因,并研究其编码蛋白CDK2的生物学功能.采用RT-PCR扩增猪Cdk2基因,运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码氨基酸特征,并预测编码蛋白的生物学功能;利用半定量RT-PCR方法分析该基因在猪各个脏器和组织中的表达情况;共聚焦显微镜观察CDK2的亚细胞定位,采用过表达和shRNA干扰技术研究CDK2在细胞周期和细胞增殖中的调控作用.结果表明,猪Cdk2基因开放阅读框(ORF)为897 bp(GenBank:JX967576),该基因与绵羊、牛、山羊、人、金仓鼠、小鼠、仓鼠和沟鼠Cdk2的核苷酸相似性依次为94.2％、94.0％、93.8％、93.4％、91.8％、91.0％、90.6％和89.9％,与牛、山羊和绵羊的亲缘关系最近;Cdk2编码298 aa,CDK2分子质量为34 ku.Cdk2 mRNA在猪10个不同脏器和组织中均有表达.CDK2定位于细胞质和细胞核中,并通过蛋白酶体途径降解.猪CDK2在PK-15细胞中过表达引起S期细胞比例显著减少及G2/M期细胞比例显著增加(P＜0.05),而G0/G1期无显著变化;相反,CDK2表达量降低引起S期细胞比例显著减少及G0/G1期细胞比例显著增加,而G2/M期无显著变化.本研究成功克隆了猪Cdk2基因并对其编码蛋白生物学功能进行了初步研究.
본연구지재극륭저Cdk2기인,병연구기편마단백CDK2적생물학공능.채용RT-PCR확증저Cdk2기인,운용생물신식학연건분석기핵감산화편마안기산특정,병예측편마단백적생물학공능;이용반정량RT-PCR방법분석해기인재저각개장기화조직중적표체정황;공취초현미경관찰CDK2적아세포정위,채용과표체화shRNA간우기술연구CDK2재세포주기화세포증식중적조공작용.결과표명,저Cdk2기인개방열독광(ORF)위897 bp(GenBank:JX967576),해기인여면양、우、산양、인、금창서、소서、창서화구서Cdk2적핵감산상사성의차위94.2％、94.0％、93.8％、93.4％、91.8％、91.0％、90.6％화89.9％,여우、산양화면양적친연관계최근;Cdk2편마298 aa,CDK2분자질량위34 ku.Cdk2 mRNA재저10개불동장기화조직중균유표체.CDK2정위우세포질화세포핵중,병통과단백매체도경강해.저CDK2재PK-15세포중과표체인기S기세포비례현저감소급G2/M기세포비례현저증가(P＜0.05),이G0/G1기무현저변화;상반,CDK2표체량강저인기S기세포비례현저감소급G0/G1기세포비례현저증가,이G2/M기무현저변화.본연구성공극륭료저Cdk2기인병대기편마단백생물학공능진행료초보연구.