CAJ | 학술논문

目的:通过靶向过氧化物酶体增殖因子活化受体PPARγ基因阻断,建立稳定干扰Leydig细胞株TM3.方法:采用慢病毒四质粒包装系统构建特异靶向小鼠PPARγ基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,用以建立PPARγ基因稳定沉默的Leydig细胞株TM3.结果:经测序证实,成功构建编码表达PPARγ短发夹结构RNA (sh-PPARγ)的慢病毒载体LV3-sh-PPARγ及对照载体LV3-Control.病毒载体转导Leydig细胞株TM3后,荧光显微镜证实细胞转染效率＞90％,Real-time PCR测定实验组TM3细胞PPARγ的mRNA表达比未处理细胞下降70％ (P ＜0.05),对照组与未处理细胞差异无显著性(P＞0.05).Western blot显示实验组PPARγ蛋白表达量比未处理细胞明显下降(P＜0.05),对照组与未处理细胞差异无显著性(P＞0.05).结论:成功构建特异靶向小鼠PPARγ基因的RNAi慢病毒载体LV3-sh-PPARγ及对照载体LV3-Control,并成功建立PPARγ表达稳定干扰的小鼠Leydig细胞株TM3,为PPARγ生殖毒性研究提供了新的细胞模型.
목적:통과파향과양화물매체증식인자활화수체PPARγ기인조단,건립은정간우Leydig세포주TM3.방법:채용만병독사질립포장계통구건특이파향소서PPARγ기인적RNA간우(RNA interference,RNAi)만병독재체,용이건립PPARγ기인은정침묵적Leydig세포주TM3.결과:경측서증실,성공구건편마표체PPARγ단발협결구RNA (sh-PPARγ)적만병독재체LV3-sh-PPARγ급대조재체LV3-Control.병독재체전도Leydig세포주TM3후,형광현미경증실세포전염효솔＞90％,Real-time PCR측정실험조TM3세포PPARγ적mRNA표체비미처리세포하강70％ (P ＜0.05),대조조여미처리세포차이무현저성(P＞0.05).Western blot현시실험조PPARγ단백표체량비미처리세포명현하강(P＜0.05),대조조여미처리세포차이무현저성(P＞0.05).결론:성공구건특이파향소서PPARγ기인적RNAi만병독재체LV3-sh-PPARγ급대조재체LV3-Control,병성공건립PPARγ표체은정간우적소서Leydig세포주TM3,위PPARγ생식독성연구제공료신적세포모형.