浙江预防医学
浙江預防醫學
절강예방의학
ZHEJIANG JOURNAL OF PREVENTIVE MEDICINE
2014年
1期
19-23
,共5页
大鼠%心脏微血管内皮细胞%原代培养%鉴定
大鼠%心髒微血管內皮細胞%原代培養%鑒定
대서%심장미혈관내피세포%원대배양%감정
目的 建立一种分离大鼠心脏微血管内皮细胞的方法.方法 雄性SD大鼠2只,快速取出心脏,去除左室外约1/4层,充分剪碎剩余组织,Ⅱ型胶原酶和胰酶先后消化20~30 min,过滤并离心收集细胞,加入培养液置于细胞培养箱中培养.结果 原代细胞基本于接种后1~2 h已大部分贴壁,24 h细胞充分伸展,并进入对数生长期,细胞增殖迅速,培养3 d时,可见细胞汇合度达80%~90%,细胞长至融合后呈典型的"铺路石"或"鹅卵石"征.免疫细胞化学鉴定表明在分离培养的大鼠心脏微血管内皮细胞中有特定Ⅷ因子及CD31表达,体外小管形成实验证明大鼠心脏微血管内皮细胞具有小管形成的能力.原代周期3~4 d,传代周期2~3 d,P2代细胞纯度达95%以上.传至P4代仍未见细胞形态及分裂增殖活性下降.结论 本方法培养大鼠心脏微血管内皮细胞简单有效,重复性好,且获得细胞数量多、纯度高,有利于实验人员掌握.
目的 建立一種分離大鼠心髒微血管內皮細胞的方法.方法 雄性SD大鼠2隻,快速取齣心髒,去除左室外約1/4層,充分剪碎剩餘組織,Ⅱ型膠原酶和胰酶先後消化20~30 min,過濾併離心收集細胞,加入培養液置于細胞培養箱中培養.結果 原代細胞基本于接種後1~2 h已大部分貼壁,24 h細胞充分伸展,併進入對數生長期,細胞增殖迅速,培養3 d時,可見細胞彙閤度達80%~90%,細胞長至融閤後呈典型的"鋪路石"或"鵝卵石"徵.免疫細胞化學鑒定錶明在分離培養的大鼠心髒微血管內皮細胞中有特定Ⅷ因子及CD31錶達,體外小管形成實驗證明大鼠心髒微血管內皮細胞具有小管形成的能力.原代週期3~4 d,傳代週期2~3 d,P2代細胞純度達95%以上.傳至P4代仍未見細胞形態及分裂增殖活性下降.結論 本方法培養大鼠心髒微血管內皮細胞簡單有效,重複性好,且穫得細胞數量多、純度高,有利于實驗人員掌握.
목적 건립일충분리대서심장미혈관내피세포적방법.방법 웅성SD대서2지,쾌속취출심장,거제좌실외약1/4층,충분전쇄잉여조직,Ⅱ형효원매화이매선후소화20~30 min,과려병리심수집세포,가입배양액치우세포배양상중배양.결과 원대세포기본우접충후1~2 h이대부분첩벽,24 h세포충분신전,병진입대수생장기,세포증식신속,배양3 d시,가견세포회합도체80%~90%,세포장지융합후정전형적"포로석"혹"아란석"정.면역세포화학감정표명재분리배양적대서심장미혈관내피세포중유특정Ⅷ인자급CD31표체,체외소관형성실험증명대서심장미혈관내피세포구유소관형성적능력.원대주기3~4 d,전대주기2~3 d,P2대세포순도체95%이상.전지P4대잉미견세포형태급분렬증식활성하강.결론 본방법배양대서심장미혈관내피세포간단유효,중복성호,차획득세포수량다、순도고,유리우실험인원장악.
