华南理工大学学报（自然科学版）
華南理工大學學報（自然科學版）
화남리공대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SOUTH CHINA UNIVERSITY OF TECHNOLOGY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2013年
10期
53-59
,共7页
余以刚%黄韵%李晓凤%肖性龙%吴晖
餘以剛%黃韻%李曉鳳%肖性龍%吳暉
여이강%황운%리효봉%초성룡%오휘
细菌%酯酶%代谢活性%噻唑橙荧光染料%PCR%DNA扩增%荧光
細菌%酯酶%代謝活性%噻唑橙熒光染料%PCR%DNA擴增%熒光
세균%지매%대사활성%새서등형광염료%PCR%DNA확증%형광
bacteria%esterase%metabolic activity%novel thiazole orange fluorescent dye%PCR%DNA amplification%fluorescence
为了建立一种新型、高效的活菌检测技术,以细菌酯酶代谢活性为判断依据,设计合成了一种新型噻唑橙荧光染料——TOMA,其结构经核磁共振谱、高分辨质谱确证.对TOMA的细胞膜穿透性、酯酶敏感性及对DNA的PCR扩增的抑制作用3方面特性进行了初步验证.结果显示:10 mg/L的TOMA于室温、黑暗条件下与活的大肠杆菌(Esche-richia coli) O157:H7混合孵育10 min后菌体发出强烈荧光,表明该分子能有效穿透细菌壁膜,并与核酸有良好的结合能力;用固定化脂肪酶对TOMA进行体外水解,水解率达83％,说明该分子的酯键能在相关酶作用下断裂;TOMA与实时荧光定量PCR联用时,该分子对细菌DNA扩增具有明显的抑制作用.以上结果证明TOMA分子设计基本达到预期目的.
為瞭建立一種新型、高效的活菌檢測技術,以細菌酯酶代謝活性為判斷依據,設計閤成瞭一種新型噻唑橙熒光染料——TOMA,其結構經覈磁共振譜、高分辨質譜確證.對TOMA的細胞膜穿透性、酯酶敏感性及對DNA的PCR擴增的抑製作用3方麵特性進行瞭初步驗證.結果顯示:10 mg/L的TOMA于室溫、黑暗條件下與活的大腸桿菌(Esche-richia coli) O157:H7混閤孵育10 min後菌體髮齣彊烈熒光,錶明該分子能有效穿透細菌壁膜,併與覈痠有良好的結閤能力;用固定化脂肪酶對TOMA進行體外水解,水解率達83％,說明該分子的酯鍵能在相關酶作用下斷裂;TOMA與實時熒光定量PCR聯用時,該分子對細菌DNA擴增具有明顯的抑製作用.以上結果證明TOMA分子設計基本達到預期目的.
위료건립일충신형、고효적활균검측기술,이세균지매대사활성위판단의거,설계합성료일충신형새서등형광염료——TOMA,기결구경핵자공진보、고분변질보학증.대TOMA적세포막천투성、지매민감성급대DNA적PCR확증적억제작용3방면특성진행료초보험증.결과현시:10 mg/L적TOMA우실온、흑암조건하여활적대장간균(Esche-richia coli) O157:H7혼합부육10 min후균체발출강렬형광,표명해분자능유효천투세균벽막,병여핵산유량호적결합능력;용고정화지방매대TOMA진행체외수해,수해솔체83％,설명해분자적지건능재상관매작용하단렬;TOMA여실시형광정량PCR련용시,해분자대세균DNA확증구유명현적억제작용.이상결과증명TOMA분자설계기본체도예기목적.
