中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2013年
12期
1181-1185
,共5页
杜东菊%杨松涛%高玉伟%夏咸柱%吕喆%胡桂学
杜東菊%楊鬆濤%高玉偉%夏鹹柱%呂喆%鬍桂學
두동국%양송도%고옥위%하함주%려철%호계학
西尼罗河病毒%重组DⅢ蛋白%间接ELISA
西尼囉河病毒%重組DⅢ蛋白%間接ELISA
서니라하병독%중조DⅢ단백%간접ELISA
West Nile virus%recombinant DⅢ protein%indirect-ELISA
目的 建立西尼罗河病毒(West Nile Virus,WNV)抗体检测方法.方法 人工合成了WNV NY99株E蛋白结构域Ⅲ(DⅢ)基因序列,构建了重组表达载体PET-28a-DⅢ.结果 重组质粒转化BL21宿主菌后诱导表达,SDS-PAGE分析表明,表达产物相对分子量17 kD,以包涵体形式存在.对表达产物作变性和复性及纯化处理,Western-blot鉴定结果表明,纯化产物可被WNV血清识别.将纯化重组蛋白包被酶标板,优化间接ELISA反应条件,抗原最佳包被浓度为3.75 μg/mL、血清最佳稀释度为1∶1 600、酶标二抗最佳稀释度1∶6 000、阴阳血清临界值为0.148.特异性、敏感性及重复性试验结果表明,本方法特异性强、敏感性高、重复性良好.结论 本研究为WNV感染的血清学诊断提供了技术储备.
目的 建立西尼囉河病毒(West Nile Virus,WNV)抗體檢測方法.方法 人工閤成瞭WNV NY99株E蛋白結構域Ⅲ(DⅢ)基因序列,構建瞭重組錶達載體PET-28a-DⅢ.結果 重組質粒轉化BL21宿主菌後誘導錶達,SDS-PAGE分析錶明,錶達產物相對分子量17 kD,以包涵體形式存在.對錶達產物作變性和複性及純化處理,Western-blot鑒定結果錶明,純化產物可被WNV血清識彆.將純化重組蛋白包被酶標闆,優化間接ELISA反應條件,抗原最佳包被濃度為3.75 μg/mL、血清最佳稀釋度為1∶1 600、酶標二抗最佳稀釋度1∶6 000、陰暘血清臨界值為0.148.特異性、敏感性及重複性試驗結果錶明,本方法特異性彊、敏感性高、重複性良好.結論 本研究為WNV感染的血清學診斷提供瞭技術儲備.
목적 건립서니라하병독(West Nile Virus,WNV)항체검측방법.방법 인공합성료WNV NY99주E단백결구역Ⅲ(DⅢ)기인서렬,구건료중조표체재체PET-28a-DⅢ.결과 중조질립전화BL21숙주균후유도표체,SDS-PAGE분석표명,표체산물상대분자량17 kD,이포함체형식존재.대표체산물작변성화복성급순화처리,Western-blot감정결과표명,순화산물가피WNV혈청식별.장순화중조단백포피매표판,우화간접ELISA반응조건,항원최가포피농도위3.75 μg/mL、혈청최가희석도위1∶1 600、매표이항최가희석도1∶6 000、음양혈청림계치위0.148.특이성、민감성급중복성시험결과표명,본방법특이성강、민감성고、중복성량호.결론 본연구위WNV감염적혈청학진단제공료기술저비.
