CAJ | 학술논문

利用基因克隆和体外转录技术制备O型口蹄疫病毒(FMDV)核酸检测标准样品.设计O型FMDV 3D基因的全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至PGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物.采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值.通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量(拷贝数),并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算.均一性结果显示瓶间差异小于5％,稳定试验表明室温20℃～25℃(相对湿度20％～50％)14 d,2℃～8℃3个月及-20℃保存1年的含量均无明显变化.核酸标准物质定值为(1.260士0.485)×108 copies,可用作O型FMDV通用核酸检测的标准质控品.
이용기인극륭화체외전록기술제비O형구제역병독(FMDV)핵산검측표준양품.설계O형FMDV 3D기인적전장개방열독광적극륭인물,RT-PCR획득상응편단,련접지PGEM-T재체,측서후채용체외전록방법제비RNA순품,초보정량희석후,혼합분장작위핵산표준양품후선물.채용실시형광정량RT-PCR방법진행균균성화은정성검험,병위탁외부실험실채용외표실시정량RT-PCR방법대전록적RNA편단진행정치.통과회제형광정량표준확증곡선계산표준물질함량(고패수),병근거위탁단위적정치결과진행불학정도적고산.균일성결과현시병간차이소우5％,은정시험표명실온20℃～25℃(상대습도20％～50％)14 d,2℃～8℃3개월급-20℃보존1년적함량균무명현변화.핵산표준물질정치위(1.260사0.485)×108 copies,가용작O형FMDV통용핵산검측적표준질공품.