基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2014年
3期
365-371
,共7页
骨髓间充质干细胞%低氧诱导因子-1%脂质体%转染
骨髓間充質榦細胞%低氧誘導因子-1%脂質體%轉染
골수간충질간세포%저양유도인자-1%지질체%전염
mesenchymal stem cell(MSC)%hypoxia inducible factor-1 (HIF-1)%liposo-me%transfection
目的 探索应用脂质体作为载体将低氧诱导因子-1α(HIF-1α)转染至间充质干细胞(MSCs)的转染方法.方法 应用脂质体作为载体将HIF-1α转染至P3代MSCs,荧光观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,评估转染效率.比较在不同情况下细胞的转染效率.将转染的MSCs、空质粒转染的MSCs和未转染的MSCs置于缺氧环境下(CoCl2模拟缺氧),比较3种细胞HIF-1α mRNA、HIF-1α蛋白的表达.鉴定转染的MSCs向成骨细胞和脂肪细胞的分化能力,及在缺氧环境中的存活率.结果 应用脂质体法可以成功将pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP转染至MSCs.当细胞汇合度在80％以上,DNA与质粒的比为(g/μL)1∶1.25,且转染时间为4h时转染效率最高,为21％.转染HIF-1α的MSCs在缺氧环境中可被成功向脂肪细胞和成骨细胞诱导分化,HIF-1α转染可以提高缺氧时MSCs存活率(P＜0.05).在缺氧条件下pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP瞬时转染的MSCs较空质粒(pcDNA3.0-eGFP)转染的MSCs和未转染的MSCs能高表达HlF-1αmRNA及HIF-1α蛋白(P＜0.05).结论 应用脂质体作为载体可以将HIF-1α转染至MSCs,HIF-1α转染的MSCs在缺氧时高表达HIF-1αmRNA及蛋白.
目的 探索應用脂質體作為載體將低氧誘導因子-1α(HIF-1α)轉染至間充質榦細胞(MSCs)的轉染方法.方法 應用脂質體作為載體將HIF-1α轉染至P3代MSCs,熒光觀察綠色熒光蛋白(GFP)錶達,評估轉染效率.比較在不同情況下細胞的轉染效率.將轉染的MSCs、空質粒轉染的MSCs和未轉染的MSCs置于缺氧環境下(CoCl2模擬缺氧),比較3種細胞HIF-1α mRNA、HIF-1α蛋白的錶達.鑒定轉染的MSCs嚮成骨細胞和脂肪細胞的分化能力,及在缺氧環境中的存活率.結果 應用脂質體法可以成功將pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP轉染至MSCs.噹細胞彙閤度在80％以上,DNA與質粒的比為(g/μL)1∶1.25,且轉染時間為4h時轉染效率最高,為21％.轉染HIF-1α的MSCs在缺氧環境中可被成功嚮脂肪細胞和成骨細胞誘導分化,HIF-1α轉染可以提高缺氧時MSCs存活率(P＜0.05).在缺氧條件下pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP瞬時轉染的MSCs較空質粒(pcDNA3.0-eGFP)轉染的MSCs和未轉染的MSCs能高錶達HlF-1αmRNA及HIF-1α蛋白(P＜0.05).結論 應用脂質體作為載體可以將HIF-1α轉染至MSCs,HIF-1α轉染的MSCs在缺氧時高錶達HIF-1αmRNA及蛋白.
목적 탐색응용지질체작위재체장저양유도인자-1α(HIF-1α)전염지간충질간세포(MSCs)적전염방법.방법 응용지질체작위재체장HIF-1α전염지P3대MSCs,형광관찰록색형광단백(GFP)표체,평고전염효솔.비교재불동정황하세포적전염효솔.장전염적MSCs、공질립전염적MSCs화미전염적MSCs치우결양배경하(CoCl2모의결양),비교3충세포HIF-1α mRNA、HIF-1α단백적표체.감정전염적MSCs향성골세포화지방세포적분화능력,급재결양배경중적존활솔.결과 응용지질체법가이성공장pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP전염지MSCs.당세포회합도재80％이상,DNA여질립적비위(g/μL)1∶1.25,차전염시간위4h시전염효솔최고,위21％.전염HIF-1α적MSCs재결양배경중가피성공향지방세포화성골세포유도분화,HIF-1α전염가이제고결양시MSCs존활솔(P＜0.05).재결양조건하pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP순시전염적MSCs교공질립(pcDNA3.0-eGFP)전염적MSCs화미전염적MSCs능고표체HlF-1αmRNA급HIF-1α단백(P＜0.05).결론 응용지질체작위재체가이장HIF-1α전염지MSCs,HIF-1α전염적MSCs재결양시고표체HIF-1αmRNA급단백.
