齐齐哈尔医学院学报
齊齊哈爾醫學院學報
제제합이의학원학보
JOURNAL OF QIQIHAR MEDICAL COLLEGE
2013年
24期
3596-3598
,共3页
HLA-B54/IgG1融合蛋白%真核表达%构象完整
HLA-B54/IgG1融閤蛋白%真覈錶達%構象完整
HLA-B54/IgG1융합단백%진핵표체%구상완정
目的 构建HLA-B54/IgG1真核表达载体,稳定转染至721.221细胞中,获得HLA-B54/IgG1Fc二聚体融合蛋白.方法 通过RT-RCR我们获得了HLA-B54的胞外段与人IgG1的CH1-CH2-CH3的cDNA,将HLA-B54与IgG1重链的恒定区插入到质粒pcDNA3.1(+)中形成pcDNA3.1(+)-HLA-B54/IgG1Fc重组基因.为了获得稳定转染,用电穿孔法将质粒pcDNA3.1(+)-HLA-B54/IgG1Fc转染到721.221细胞中,大量收集通过G418筛选的721.221阳性克隆株的无血清的上清,通过PEG20000浓缩得到可溶性HLA-B54/IgG1Fc二聚体融合蛋白,双抗体夹心ELISA和Western-blot(利用MHCⅠ类特异性抗体、人IgG的Fc段特异性抗体)来鉴定融合蛋白.结果 限制性内切酶酶切鉴定及序列测定等证实了成功构建了pcDNA3.1+[HLA-B54/IgG1Fc]重组质粒.ELISA和Western-blot结果表明:HLA-B54/IgG1Fc融合基因能够在721.221细胞中表达.融合蛋白由预期的HLA-B54的胞外段与IgG1的Fc段两个部分组成.结论 二聚体融合蛋白HLA-B54/IgG1的构建有助于理解HLA-B54限制性的T细胞反应.
目的 構建HLA-B54/IgG1真覈錶達載體,穩定轉染至721.221細胞中,穫得HLA-B54/IgG1Fc二聚體融閤蛋白.方法 通過RT-RCR我們穫得瞭HLA-B54的胞外段與人IgG1的CH1-CH2-CH3的cDNA,將HLA-B54與IgG1重鏈的恆定區插入到質粒pcDNA3.1(+)中形成pcDNA3.1(+)-HLA-B54/IgG1Fc重組基因.為瞭穫得穩定轉染,用電穿孔法將質粒pcDNA3.1(+)-HLA-B54/IgG1Fc轉染到721.221細胞中,大量收集通過G418篩選的721.221暘性剋隆株的無血清的上清,通過PEG20000濃縮得到可溶性HLA-B54/IgG1Fc二聚體融閤蛋白,雙抗體夾心ELISA和Western-blot(利用MHCⅠ類特異性抗體、人IgG的Fc段特異性抗體)來鑒定融閤蛋白.結果 限製性內切酶酶切鑒定及序列測定等證實瞭成功構建瞭pcDNA3.1+[HLA-B54/IgG1Fc]重組質粒.ELISA和Western-blot結果錶明:HLA-B54/IgG1Fc融閤基因能夠在721.221細胞中錶達.融閤蛋白由預期的HLA-B54的胞外段與IgG1的Fc段兩箇部分組成.結論 二聚體融閤蛋白HLA-B54/IgG1的構建有助于理解HLA-B54限製性的T細胞反應.
목적 구건HLA-B54/IgG1진핵표체재체,은정전염지721.221세포중,획득HLA-B54/IgG1Fc이취체융합단백.방법 통과RT-RCR아문획득료HLA-B54적포외단여인IgG1적CH1-CH2-CH3적cDNA,장HLA-B54여IgG1중련적항정구삽입도질립pcDNA3.1(+)중형성pcDNA3.1(+)-HLA-B54/IgG1Fc중조기인.위료획득은정전염,용전천공법장질립pcDNA3.1(+)-HLA-B54/IgG1Fc전염도721.221세포중,대량수집통과G418사선적721.221양성극륭주적무혈청적상청,통과PEG20000농축득도가용성HLA-B54/IgG1Fc이취체융합단백,쌍항체협심ELISA화Western-blot(이용MHCⅠ류특이성항체、인IgG적Fc단특이성항체)래감정융합단백.결과 한제성내절매매절감정급서렬측정등증실료성공구건료pcDNA3.1+[HLA-B54/IgG1Fc]중조질립.ELISA화Western-blot결과표명:HLA-B54/IgG1Fc융합기인능구재721.221세포중표체.융합단백유예기적HLA-B54적포외단여IgG1적Fc단량개부분조성.결론 이취체융합단백HLA-B54/IgG1적구건유조우리해HLA-B54한제성적T세포반응.
