化工学报
化工學報
화공학보
JOURNAL OF CHEMICAL INDUSY AND ENGINEERING (CHINA)
2014年
1期
305-312
,共8页
黄寿锟%关怡新%于洪巍%姚善泾
黃壽錕%關怡新%于洪巍%姚善涇
황수곤%관이신%우홍외%요선경
生物分离%蛋白质复性%聚集(作用)%二硫键%巯基微球%重组γ-猪肝酯酶
生物分離%蛋白質複性%聚集(作用)%二硫鍵%巰基微毬%重組γ-豬肝酯酶
생물분리%단백질복성%취집(작용)%이류건%구기미구%중조γ-저간지매
bioseparation%protein refolding%aggregation%disulfide bond%thiol-carrying latex particles%recombinant γ-isoenzyme of pig liver esterase
猪肝酯酶(PLE)是一种广泛应用于光学活性醇或羧酸合成的水解酶.大肠杆菌异体表达为大规模生产猪肝酯酶γ同工酶提供了可能,但表达过程中会形成包涵体,需经体外重折叠恢复其生物活性.针对γ-PLE含二硫键的特点,制备了三种不同巯基负载量的功能聚合物微球SG-DTT(6.1 μmol ·g-1、25.2 μmol·g-1和143.4 μmol·g-1),将其应用于协助γ-PLE包涵体体外复性,并考察了微球浓度、pH、温度和尿素浓度对复性效果的影响.复性过程需要适宜的氧化还原环境,较高的巯基负载量微球协助复性效果较好,当γ-PLE浓度为1000 μg·ml-1时,微球协助复性后γ-PLE的活性可达到1885 U·L-1,比对照组提高了72％.研究表明,巯基微球能有效促进二硫键的正确配对,阻止蛋白分子间的聚集,是一种新型高效的复性添加剂.
豬肝酯酶(PLE)是一種廣汎應用于光學活性醇或羧痠閤成的水解酶.大腸桿菌異體錶達為大規模生產豬肝酯酶γ同工酶提供瞭可能,但錶達過程中會形成包涵體,需經體外重摺疊恢複其生物活性.針對γ-PLE含二硫鍵的特點,製備瞭三種不同巰基負載量的功能聚閤物微毬SG-DTT(6.1 μmol ·g-1、25.2 μmol·g-1和143.4 μmol·g-1),將其應用于協助γ-PLE包涵體體外複性,併攷察瞭微毬濃度、pH、溫度和尿素濃度對複性效果的影響.複性過程需要適宜的氧化還原環境,較高的巰基負載量微毬協助複性效果較好,噹γ-PLE濃度為1000 μg·ml-1時,微毬協助複性後γ-PLE的活性可達到1885 U·L-1,比對照組提高瞭72％.研究錶明,巰基微毬能有效促進二硫鍵的正確配對,阻止蛋白分子間的聚集,是一種新型高效的複性添加劑.
저간지매(PLE)시일충엄범응용우광학활성순혹최산합성적수해매.대장간균이체표체위대규모생산저간지매γ동공매제공료가능,단표체과정중회형성포함체,수경체외중절첩회복기생물활성.침대γ-PLE함이류건적특점,제비료삼충불동구기부재량적공능취합물미구SG-DTT(6.1 μmol ·g-1、25.2 μmol·g-1화143.4 μmol·g-1),장기응용우협조γ-PLE포함체체외복성,병고찰료미구농도、pH、온도화뇨소농도대복성효과적영향.복성과정수요괄의적양화환원배경,교고적구기부재량미구협조복성효과교호,당γ-PLE농도위1000 μg·ml-1시,미구협조복성후γ-PLE적활성가체도1885 U·L-1,비대조조제고료72％.연구표명,구기미구능유효촉진이류건적정학배대,조지단백분자간적취집,시일충신형고효적복성첨가제.
