中华肺部疾病杂志（电子版）
中華肺部疾病雜誌（電子版）
중화폐부질병잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF LUNG DISEASE（ELECTRONIC EDITION）
2013年
6期
13-15
,共3页
孙欢%杨俊俊%贺斌峰%王关嵩
孫歡%楊俊俊%賀斌峰%王關嵩
손환%양준준%하빈봉%왕관숭
Rab5a%质粒转化%质粒扩增%DH5α感受态细胞
Rab5a%質粒轉化%質粒擴增%DH5α感受態細胞
Rab5a%질립전화%질립확증%DH5α감수태세포
Rab5a%Plasmid transformation%Plasmid amplification%DH5α competent cell
目的 对含野生型大鼠Rab5a基因载体pcDNA3-Rab5 (a) WT进行体外转化、扩增及鉴定,为基于Rah5a的相关研究提供高纯度、高丰度的表达载体.方法 取pcDNA3-Rab5 (a) WT质粒转化DH 5α感受态菌,再接种到含氨苄青霉素的LB琼脂培养板进行抗性筛选,对挑取的阳性克隆进行LB液体培养基培养后抽提质粒,用超微量核酸蛋白测定仪测定提取质粒的纯度和浓度,并取样进行琼脂糖凝胶电泳及PCR鉴定.结果 经转化后获得了大量抗氨苄青霉素的阳性克隆菌落,挑取阳性克隆并经培养后提取的pcDNA3-Rab5 (a) WT质粒均为浓度高、纯度高、超螺旋结构为主的质粒.pcDNA3-Rab5(a)WT经PCR后得到Rab5a基因.结论 成功转化并扩增了pcDNA3-Rab5 (a) WT,为Rab5的相关研究提供了高质量的表达载体.
目的 對含野生型大鼠Rab5a基因載體pcDNA3-Rab5 (a) WT進行體外轉化、擴增及鑒定,為基于Rah5a的相關研究提供高純度、高豐度的錶達載體.方法 取pcDNA3-Rab5 (a) WT質粒轉化DH 5α感受態菌,再接種到含氨芐青黴素的LB瓊脂培養闆進行抗性篩選,對挑取的暘性剋隆進行LB液體培養基培養後抽提質粒,用超微量覈痠蛋白測定儀測定提取質粒的純度和濃度,併取樣進行瓊脂糖凝膠電泳及PCR鑒定.結果 經轉化後穫得瞭大量抗氨芐青黴素的暘性剋隆菌落,挑取暘性剋隆併經培養後提取的pcDNA3-Rab5 (a) WT質粒均為濃度高、純度高、超螺鏇結構為主的質粒.pcDNA3-Rab5(a)WT經PCR後得到Rab5a基因.結論 成功轉化併擴增瞭pcDNA3-Rab5 (a) WT,為Rab5的相關研究提供瞭高質量的錶達載體.
목적 대함야생형대서Rab5a기인재체pcDNA3-Rab5 (a) WT진행체외전화、확증급감정,위기우Rah5a적상관연구제공고순도、고봉도적표체재체.방법 취pcDNA3-Rab5 (a) WT질립전화DH 5α감수태균,재접충도함안변청매소적LB경지배양판진행항성사선,대도취적양성극륭진행LB액체배양기배양후추제질립,용초미량핵산단백측정의측정제취질립적순도화농도,병취양진행경지당응효전영급PCR감정.결과 경전화후획득료대량항안변청매소적양성극륭균락,도취양성극륭병경배양후제취적pcDNA3-Rab5 (a) WT질립균위농도고、순도고、초라선결구위주적질립.pcDNA3-Rab5(a)WT경PCR후득도Rab5a기인.결론 성공전화병확증료pcDNA3-Rab5 (a) WT,위Rab5적상관연구제공료고질량적표체재체.
