植物保护
植物保護
식물보호
PLANT PROTECTION
2014年
5期
111-116
,共6页
韩剑%罗明%徐金虹%王同仁%张祥林
韓劍%囉明%徐金虹%王同仁%張祥林
한검%라명%서금홍%왕동인%장상림
枣疯病植原体%TaqMan 探针%实时荧光定量 PCR%检测
棘瘋病植原體%TaqMan 探針%實時熒光定量 PCR%檢測
조풍병식원체%TaqMan 탐침%실시형광정량 PCR%검측
jujube witches’broom phytoplasma%TaqMan probe%real-time fluorescent quantitative PCR%detection
根据枣疯病植原体16S rDNA 基因保守区域设计、合成特异性引物和 TaqMan 探针，以构建的重组质粒作为阳性标准品，建立并优化了对枣疯病植原体的 TaqMan 实时荧光定量 PCR 检测方法。对优化后的方法进行灵敏度、特异性及稳定性评价，制作了标准曲线。结果显示，制作的标准曲线有极好的线性关系，相关系数（r2）达到0．998，建立的实时荧光定量 PCR 检测方法能够特异性地检测枣疯病植原体，能检测到60拷贝的质粒 DNA。本研究建立的实时荧光定量 PCR 检测方法灵敏度、特异性、重复性好，不仅能够实现对枣疯病植原体的快速检测，而且为实现从病原定量水平上对枣疯病病情分级奠定了基础。
根據棘瘋病植原體16S rDNA 基因保守區域設計、閤成特異性引物和 TaqMan 探針，以構建的重組質粒作為暘性標準品，建立併優化瞭對棘瘋病植原體的 TaqMan 實時熒光定量 PCR 檢測方法。對優化後的方法進行靈敏度、特異性及穩定性評價，製作瞭標準麯線。結果顯示，製作的標準麯線有極好的線性關繫，相關繫數（r2）達到0．998，建立的實時熒光定量 PCR 檢測方法能夠特異性地檢測棘瘋病植原體，能檢測到60拷貝的質粒 DNA。本研究建立的實時熒光定量 PCR 檢測方法靈敏度、特異性、重複性好，不僅能夠實現對棘瘋病植原體的快速檢測，而且為實現從病原定量水平上對棘瘋病病情分級奠定瞭基礎。
근거조풍병식원체16S rDNA 기인보수구역설계、합성특이성인물화 TaqMan 탐침，이구건적중조질립작위양성표준품，건립병우화료대조풍병식원체적 TaqMan 실시형광정량 PCR 검측방법。대우화후적방법진행령민도、특이성급은정성평개，제작료표준곡선。결과현시，제작적표준곡선유겁호적선성관계，상관계수（r2）체도0．998，건립적실시형광정량 PCR 검측방법능구특이성지검측조풍병식원체，능검측도60고패적질립 DNA。본연구건립적실시형광정량 PCR 검측방법령민도、특이성、중복성호，불부능구실현대조풍병식원체적쾌속검측，이차위실현종병원정량수평상대조풍병병정분급전정료기출。
A set of primers and TaqMan probe specific for Jujube witches’broom phytoplasma were designed ac-cording to the conserved region of 16S rDNA gene,and the recombinant plasmid was constructed as a standard control.A TaqMan real-time fluorescent PCR assay for quantitative detection of the pathogen was established and optimized.The evaluation assay indicated that a good linear correlation was demonstrated in the standard curve for the real-time fluorescent PCR assay,with the correlation coefficient (r 2 )of 0.998.The method was specific to jujube witches’broom phytoplasma,and it can detect 60 copies/μL plasmid DNA.It not only provides a sensi-tive,specific and reproducible method for detection of jujube witches’broom phytoplasma,but also lays the foun-dation for the grading system of the pathogen at quantitative level.
