CAJ | 학술논문

目的:利用针对兰尼碱受体1(Ryanodine receptor 1,RyR1)的小干扰RNA(siRNA),研究沉默RyR1基因表达对人肺癌细胞株A549细胞生物学活性的影响.方法:(1)设计并合成针对RyR1基因的siRNA及阴性对照片段(不针对任何已知人的mRNA)和阳性对照片段(沉默GAPDH内参基因),转染肺癌细胞A549;(2)实时荧光定量-PCR(Real-time fluorogentic quantitative PCR,FQ-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)分别检测转染后RyR1 mRNA表达及RyR1蛋白表达的变化;(3)MTT实验检测转染前后细胞增殖能力的变化;(4)流式细胞术检测转染前后细胞周期及细胞凋亡的状态.结果:(1) FQ-PCR结果显示RyR1 siRNA-1969可下调RyR1 mRNA的表达,相对表达量与阳性对照组和阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);(2)转染RyR1 siRNA后RyR1蛋白表达下调;(3)MTT实验显示RyR1表达沉黙后的A549细胞生长缓慢,与对照组相比较差异有统计学意义(P＜0.05);(4)转染后细胞凋亡率较空白对照组(正常培养的A549细胞)和阴性对照组(转染阴性对照小RNA片段的A549细胞株)显著增高(P＜0.001),处于G0～G1期的细胞明显增多(P＜0.001).结论:RyR1基因可能为肺癌的基因治疗提供新策略.
목적:이용침대란니감수체1(Ryanodine receptor 1,RyR1)적소간우RNA(siRNA),연구침묵RyR1기인표체대인폐암세포주A549세포생물학활성적영향.방법:(1)설계병합성침대RyR1기인적siRNA급음성대조편단(불침대임하이지인적mRNA)화양성대조편단(침묵GAPDH내삼기인),전염폐암세포A549;(2)실시형광정량-PCR(Real-time fluorogentic quantitative PCR,FQ-PCR)화단백질인적(Western blot)분별검측전염후RyR1 mRNA표체급RyR1단백표체적변화;(3)MTT실험검측전염전후세포증식능력적변화;(4)류식세포술검측전염전후세포주기급세포조망적상태.결과:(1) FQ-PCR결과현시RyR1 siRNA-1969가하조RyR1 mRNA적표체,상대표체량여양성대조조화음성대조조비교차이유통계학의의(P＜0.01);(2)전염RyR1 siRNA후RyR1단백표체하조;(3)MTT실험현시RyR1표체침묵후적A549세포생장완만,여대조조상비교차이유통계학의의(P＜0.05);(4)전염후세포조망솔교공백대조조(정상배양적A549세포)화음성대조조(전염음성대조소RNA편단적A549세포주)현저증고(P＜0.001),처우G0～G1기적세포명현증다(P＜0.001).결론:RyR1기인가능위폐암적기인치료제공신책략.