CAJ | 학술논문

[目的]建立一种能够快速、灵敏地检测鸡马立克氏病病毒(MDV)的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法.[方法]针对马立克氏病毒特异的Meq基因序列设计引物,利用SYBR Green Ⅰ染料建立检测马立克氏病毒的实时荧光定量PCR方法,进行敏感性、特异性、重复性试验,并应用该方法检测了罗曼蛋鸡、AA肉鸡、二郎山山地鸡SD02和SD03品系4种鸡只感染组和对照组样本的脾、法氏囊、胸腺等组织中的病毒拷贝数.[结果]该方法建立的定量标准曲线荧光阈值循环数(Threshold cycle,Ct)与模板拷贝数呈良好线性关系(r=0.996),扩增效率(E)为96％,熔解曲线分析显示其PCR扩增具有良好的特异性,敏感性和重复性试验证明该方法具有较高的灵敏度和稳定性,最低检测浓度为102拷贝/μL.同时运用该方法对试验样本进行检测,结果显示在4个感染组鸡只的肝,脾,肾,胸腺,法氏囊组织中均检测出Meq的拷贝,并计算出了待测样品的病毒拷贝数,相反在未感染组却没有检测出任何Meq的拷贝.试验结果还发现二郎山山地鸡两品系各组织中MDV的拷贝数显著低于AA肉鸡和罗曼蛋鸡各组织.[结论]建立的检测方法能够快速检测马立克氏病毒,结果准确,成本低廉,可以将其作为生产上监控马立克氏病的一个重要手段.
[목적]건립일충능구쾌속、령민지검측계마립극씨병병독(MDV)적SYBR Green Ⅰ실시형광정량검측방법.[방법]침대마립극씨병독특이적Meq기인서렬설계인물,이용SYBR Green Ⅰ염료건립검측마립극씨병독적실시형광정량PCR방법,진행민감성、특이성、중복성시험,병응용해방법검측료라만단계、AA육계、이랑산산지계SD02화SD03품계4충계지감염조화대조조양본적비、법씨낭、흉선등조직중적병독고패수.[결과]해방법건립적정량표준곡선형광역치순배수(Threshold cycle,Ct)여모판고패수정량호선성관계(r=0.996),확증효솔(E)위96％,용해곡선분석현시기PCR확증구유량호적특이성,민감성화중복성시험증명해방법구유교고적령민도화은정성,최저검측농도위102고패/μL.동시운용해방법대시험양본진행검측,결과현시재4개감염조계지적간,비,신,흉선,법씨낭조직중균검측출Meq적고패,병계산출료대측양품적병독고패수,상반재미감염조각몰유검측출임하Meq적고패.시험결과환발현이랑산산지계량품계각조직중MDV적고패수현저저우AA육계화라만단계각조직.[결론]건립적검측방법능구쾌속검측마립극씨병독,결과준학,성본저렴,가이장기작위생산상감공마립극씨병적일개중요수단.