CAJ | 학술논문

目的:探讨LMP-1重组慢病毒载体体外转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的方法,并检测LMP-1基因对BMSC增殖能力的影响及表达.方法:选取清洁级4周龄SD大鼠6只(雌雄不限),无菌条件下提取骨髓间充质干细胞并培养至第3代,设立空白对照组(未经特殊处理,只有第3代骨髓间充质干细胞)、慢病毒载体转染组(在未经特殊处理的第3代骨髓间充质干细胞中加入PGC-FU-GFP及转染试剂Polybrene)和重组基因转染组(在未经特殊处理的第3代骨髓间充质干细胞中加入PGC-FU-LMP-1-GFP及转染试剂Polybrene)进行转染.转染48 h后,通过免疫荧光显微镜观察荧光表达,流式细胞仪检测慢病毒的转染效率,采用MTT法评价慢病毒转染对BMSC增殖的影响;Western Blot检测转染后基因的表达情况.结果:①成功培养出第3代SD大鼠BMSC,以100的感染复数(MOI)转染,48 h后免疫荧光显微镜下可见大量绿色荧光蛋白表达,转染效率达67％;②不同时间点慢病毒载体转染组和重组基因转染组,与空白对照组细胞增殖比较差异无统计学意义;③Western Blot检测示重组基因转染组72 kDa处有条特征带,其大小与LMP-1融合蛋白(～50kDa+28kDa=78kDa)基本吻合.结论:经LMP-1基因慢病毒重组体转染大鼠骨髓间充质干细胞对其增殖活力没有影响并可有效表达LMP-1.
목적:탐토LMP-1중조만병독재체체외전염대서골수간충질간세포(BMSC)적방법,병검측LMP-1기인대BMSC증식능력적영향급표체.방법:선취청길급4주령SD대서6지(자웅불한),무균조건하제취골수간충질간세포병배양지제3대,설립공백대조조(미경특수처리,지유제3대골수간충질간세포)、만병독재체전염조(재미경특수처리적제3대골수간충질간세포중가입PGC-FU-GFP급전염시제Polybrene)화중조기인전염조(재미경특수처리적제3대골수간충질간세포중가입PGC-FU-LMP-1-GFP급전염시제Polybrene)진행전염.전염48 h후,통과면역형광현미경관찰형광표체,류식세포의검측만병독적전염효솔,채용MTT법평개만병독전염대BMSC증식적영향;Western Blot검측전염후기인적표체정황.결과:①성공배양출제3대SD대서BMSC,이100적감염복수(MOI)전염,48 h후면역형광현미경하가견대량록색형광단백표체,전염효솔체67％;②불동시간점만병독재체전염조화중조기인전염조,여공백대조조세포증식비교차이무통계학의의;③Western Blot검측시중조기인전염조72 kDa처유조특정대,기대소여LMP-1융합단백(～50kDa+28kDa=78kDa)기본문합.결론:경LMP-1기인만병독중조체전염대서골수간충질간세포대기증식활력몰유영향병가유효표체LMP-1.