南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
12期
2080-2084
,共5页
黎铭%马春霞%彭金霞%兰宗宝%谢达祥%赵永贞%陈晓汉
黎銘%馬春霞%彭金霞%蘭宗寶%謝達祥%趙永貞%陳曉漢
려명%마춘하%팽금하%란종보%사체상%조영정%진효한
凡纳滨对虾%表达载体%白斑综合症病毒(WSSV)%启动子%口服疫苗
凡納濱對蝦%錶達載體%白斑綜閤癥病毒(WSSV)%啟動子%口服疫苗
범납빈대하%표체재체%백반종합증병독(WSSV)%계동자%구복역묘
Litopenaeus vannamei%expression vector%white spot syndrome virus (WSSV)%promoter%oral vaccine
[目的]构建一种能在对虾细胞内稳定存在的新型表达载体,为对虾口服疫苗的研制奠定基础.[方法]设计特异性引物,以对虾白斑综合症病毒(WSSV)DNA为模板,PCR扩增早期基因启动子IE1的不同长度片段IE(-94/+52)和IE(-945/+52);利用限制性酶切及连接的方法,以IE(-94/+52)和IE(-945/+52)替换pcDNA3.1-GFP的CMV启动子;然后将构建好的表达载体与阳离子脂质体转染试剂TransLipidTM混合,肌肉注射凡纳滨对虾.[结果]经双酶切鉴定,表达载体pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP、pcDNA3.1-IE (-945/+52)-GFP分别获得6150和146bp、6150和997 bp的目的条带;注射pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP、pcDNA3.1-IE(-945/+52)-GFP的对虾部分体细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光,且注射pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP的绿色荧光强度强于注射pcDNA3.1-IE (-945/+52)-GFP.[结论]构建的两个新型表达载体pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP、pcDNA3.1-IE(-945/+52)-GFP均可用于对虾病毒抗原蛋白基因的表达.
[目的]構建一種能在對蝦細胞內穩定存在的新型錶達載體,為對蝦口服疫苗的研製奠定基礎.[方法]設計特異性引物,以對蝦白斑綜閤癥病毒(WSSV)DNA為模闆,PCR擴增早期基因啟動子IE1的不同長度片段IE(-94/+52)和IE(-945/+52);利用限製性酶切及連接的方法,以IE(-94/+52)和IE(-945/+52)替換pcDNA3.1-GFP的CMV啟動子;然後將構建好的錶達載體與暘離子脂質體轉染試劑TransLipidTM混閤,肌肉註射凡納濱對蝦.[結果]經雙酶切鑒定,錶達載體pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP、pcDNA3.1-IE (-945/+52)-GFP分彆穫得6150和146bp、6150和997 bp的目的條帶;註射pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP、pcDNA3.1-IE(-945/+52)-GFP的對蝦部分體細胞在熒光顯微鏡下可見綠色熒光,且註射pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP的綠色熒光彊度彊于註射pcDNA3.1-IE (-945/+52)-GFP.[結論]構建的兩箇新型錶達載體pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP、pcDNA3.1-IE(-945/+52)-GFP均可用于對蝦病毒抗原蛋白基因的錶達.
[목적]구건일충능재대하세포내은정존재적신형표체재체,위대하구복역묘적연제전정기출.[방법]설계특이성인물,이대하백반종합증병독(WSSV)DNA위모판,PCR확증조기기인계동자IE1적불동장도편단IE(-94/+52)화IE(-945/+52);이용한제성매절급련접적방법,이IE(-94/+52)화IE(-945/+52)체환pcDNA3.1-GFP적CMV계동자;연후장구건호적표체재체여양리자지질체전염시제TransLipidTM혼합,기육주사범납빈대하.[결과]경쌍매절감정,표체재체pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP、pcDNA3.1-IE (-945/+52)-GFP분별획득6150화146bp、6150화997 bp적목적조대;주사pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP、pcDNA3.1-IE(-945/+52)-GFP적대하부분체세포재형광현미경하가견록색형광,차주사pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP적록색형광강도강우주사pcDNA3.1-IE (-945/+52)-GFP.[결론]구건적량개신형표체재체pcDNA3.1-IE(-94/+52)-GFP、pcDNA3.1-IE(-945/+52)-GFP균가용우대하병독항원단백기인적표체.
