南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
12期
1985-1991
,共7页
毛超%戴青冬%汪军%刘一贤%杨腊英%郭立佳%黄俊生
毛超%戴青鼕%汪軍%劉一賢%楊臘英%郭立佳%黃俊生
모초%대청동%왕군%류일현%양석영%곽립가%황준생
香蕉枯萎病菌4号生理小种%B2菌株%农杆菌转化%GFP基因
香蕉枯萎病菌4號生理小種%B2菌株%農桿菌轉化%GFP基因
향초고위병균4호생리소충%B2균주%농간균전화%GFP기인
Fusarium oxysporum f.sp.cubense race 4%B2 strain%agrobacterium-mediated transformation (ATMT)%GFP gene
[目的]通过农杆菌介导的遗传转化(ATMT)方法,建立香蕉枯萎病4号生理小种的高效转化体系,构建病原菌的突变体库并进行筛选,为已突变基因提供分子标记,在分子水平上对香蕉枯萎病菌的功能基因进行深入研究.[方法]通过单因子变量(试验材料、真菌孢子浓度、农杆菌预诱导终浓度、IM诱导培养基pH、共培养介质、共培养时AS浓度、共培养温度)试验,研究影响农杆菌介导的遗传转化效率的关键因素,并通过形态观察与致病性试验筛选突变体.[结果]得到的最佳转化条件为:农杆菌预诱导浓度OD600=0.8,病原菌孢子浓度106 CFU/mL,转化受体材料为分生孢子,共培养培养基pH 5.4,共培养温度25℃,共培养培养基中AS浓度200 μmol/L,共培养介质为硝酸纤维素膜.通过条件优化,转化效率可达到800～900个转化子/106个孢子.[结论]通过农杆菌介导的遗传转化成功将GFP基因转入病原菌中并表达,构建了病原菌的T-DNA插入突变体库,并通过筛选得到多个表型和致病性发生变化的突变体,为香蕉枯萎病菌基因组功能注释的研究奠定了基础.
[目的]通過農桿菌介導的遺傳轉化(ATMT)方法,建立香蕉枯萎病4號生理小種的高效轉化體繫,構建病原菌的突變體庫併進行篩選,為已突變基因提供分子標記,在分子水平上對香蕉枯萎病菌的功能基因進行深入研究.[方法]通過單因子變量(試驗材料、真菌孢子濃度、農桿菌預誘導終濃度、IM誘導培養基pH、共培養介質、共培養時AS濃度、共培養溫度)試驗,研究影響農桿菌介導的遺傳轉化效率的關鍵因素,併通過形態觀察與緻病性試驗篩選突變體.[結果]得到的最佳轉化條件為:農桿菌預誘導濃度OD600=0.8,病原菌孢子濃度106 CFU/mL,轉化受體材料為分生孢子,共培養培養基pH 5.4,共培養溫度25℃,共培養培養基中AS濃度200 μmol/L,共培養介質為硝痠纖維素膜.通過條件優化,轉化效率可達到800～900箇轉化子/106箇孢子.[結論]通過農桿菌介導的遺傳轉化成功將GFP基因轉入病原菌中併錶達,構建瞭病原菌的T-DNA插入突變體庫,併通過篩選得到多箇錶型和緻病性髮生變化的突變體,為香蕉枯萎病菌基因組功能註釋的研究奠定瞭基礎.
[목적]통과농간균개도적유전전화(ATMT)방법,건립향초고위병4호생리소충적고효전화체계,구건병원균적돌변체고병진행사선,위이돌변기인제공분자표기,재분자수평상대향초고위병균적공능기인진행심입연구.[방법]통과단인자변량(시험재료、진균포자농도、농간균예유도종농도、IM유도배양기pH、공배양개질、공배양시AS농도、공배양온도)시험,연구영향농간균개도적유전전화효솔적관건인소,병통과형태관찰여치병성시험사선돌변체.[결과]득도적최가전화조건위:농간균예유도농도OD600=0.8,병원균포자농도106 CFU/mL,전화수체재료위분생포자,공배양배양기pH 5.4,공배양온도25℃,공배양배양기중AS농도200 μmol/L,공배양개질위초산섬유소막.통과조건우화,전화효솔가체도800～900개전화자/106개포자.[결론]통과농간균개도적유전전화성공장GFP기인전입병원균중병표체,구건료병원균적T-DNA삽입돌변체고,병통과사선득도다개표형화치병성발생변화적돌변체,위향초고위병균기인조공능주석적연구전정료기출.
