中国药理学与毒理学杂志
中國藥理學與毒理學雜誌
중국약이학여독이학잡지
CHINESE JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY
2013年
6期
941-947
,共7页
张庆华%项梦琦%郭益添%叶艳清%蒲泽锦%冯家琳%吴灵飞
張慶華%項夢琦%郭益添%葉豔清%蒲澤錦%馮傢琳%吳靈飛
장경화%항몽기%곽익첨%협염청%포택금%풍가림%오령비
腺苷%肝癌,HepG2细胞%细胞凋亡%钙离子%线粒体膜电位
腺苷%肝癌,HepG2細胞%細胞凋亡%鈣離子%線粒體膜電位
선감%간암,HepG2세포%세포조망%개리자%선립체막전위
adenosine%hepatic cell cancer%HepG2 cell%apoptosis%Ca2+%mitochondrial membrane potential
目的 探讨腺苷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其与Ca2相关的机制.方法 CCK8法测定腺苷1.0,2.0,4.0和6.0 mmol·L-1分别作用24,36和48 h后对HepG2细胞存活的抑制率.腺苷1.0,2.0和4.0 mmol· L-1作用24 h后,AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,双波长荧光分光光度法和激光共聚焦检测细胞内游离Ca2+浓度,流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位,实时荧光定量PCR及Western蛋白质印迹法分别检测m-钙蛋白酶、胱天蛋白酶4、Bax、Bak、胱天蛋白酶3基因和蛋白的表达.结果 腺苷可显著抑制HepG2细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性;随腺苷浓度由1.0,2.0增加到4.0 mmol·L-1,细胞凋亡率分别由(20.30±1.23)％和(28.50±2.32)％增至(38.10±4.09)％,并伴有细胞内游离Ca2+浓度增加1.17±0.02,1.28±0.03和(1.49±0.04)倍,以及线粒体膜电位下降,由703±53分别降至504 ±34,315 ±27和124±10(P＜0.01),同时m-钙蛋白酶、胱天蛋白酶4、Bax、Bak、胱天蛋白酶3 mRNA及蛋白表达水平明显增高(P＜0.05).结论 腺苷可通过提高细胞游离Ca2+水平,激活钙依赖蛋白,并激活内源性内质网应激胱天蛋白酶4信号转导途径而诱导HepG2细胞凋亡.
目的 探討腺苷誘導人肝癌HepG2細胞凋亡及其與Ca2相關的機製.方法 CCK8法測定腺苷1.0,2.0,4.0和6.0 mmol·L-1分彆作用24,36和48 h後對HepG2細胞存活的抑製率.腺苷1.0,2.0和4.0 mmol· L-1作用24 h後,AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡率,雙波長熒光分光光度法和激光共聚焦檢測細胞內遊離Ca2+濃度,流式細胞術檢測細胞內線粒體膜電位,實時熒光定量PCR及Western蛋白質印跡法分彆檢測m-鈣蛋白酶、胱天蛋白酶4、Bax、Bak、胱天蛋白酶3基因和蛋白的錶達.結果 腺苷可顯著抑製HepG2細胞的增殖,呈濃度和時間依賴性;隨腺苷濃度由1.0,2.0增加到4.0 mmol·L-1,細胞凋亡率分彆由(20.30±1.23)％和(28.50±2.32)％增至(38.10±4.09)％,併伴有細胞內遊離Ca2+濃度增加1.17±0.02,1.28±0.03和(1.49±0.04)倍,以及線粒體膜電位下降,由703±53分彆降至504 ±34,315 ±27和124±10(P＜0.01),同時m-鈣蛋白酶、胱天蛋白酶4、Bax、Bak、胱天蛋白酶3 mRNA及蛋白錶達水平明顯增高(P＜0.05).結論 腺苷可通過提高細胞遊離Ca2+水平,激活鈣依賴蛋白,併激活內源性內質網應激胱天蛋白酶4信號轉導途徑而誘導HepG2細胞凋亡.
목적 탐토선감유도인간암HepG2세포조망급기여Ca2상관적궤제.방법 CCK8법측정선감1.0,2.0,4.0화6.0 mmol·L-1분별작용24,36화48 h후대HepG2세포존활적억제솔.선감1.0,2.0화4.0 mmol· L-1작용24 h후,AnnexinV-FITC/PI쌍염법검측세포조망솔,쌍파장형광분광광도법화격광공취초검측세포내유리Ca2+농도,류식세포술검측세포내선립체막전위,실시형광정량PCR급Western단백질인적법분별검측m-개단백매、광천단백매4、Bax、Bak、광천단백매3기인화단백적표체.결과 선감가현저억제HepG2세포적증식,정농도화시간의뢰성;수선감농도유1.0,2.0증가도4.0 mmol·L-1,세포조망솔분별유(20.30±1.23)％화(28.50±2.32)％증지(38.10±4.09)％,병반유세포내유리Ca2+농도증가1.17±0.02,1.28±0.03화(1.49±0.04)배,이급선립체막전위하강,유703±53분별강지504 ±34,315 ±27화124±10(P＜0.01),동시m-개단백매、광천단백매4、Bax、Bak、광천단백매3 mRNA급단백표체수평명현증고(P＜0.05).결론 선감가통과제고세포유리Ca2+수평,격활개의뢰단백,병격활내원성내질망응격광천단백매4신호전도도경이유도HepG2세포조망.
