CAJ | 학술논문

为建立一种快速的猪伪狂犬病毒抗体检测方法,本研究参照已发表的PRV SA株基因组序列,PCR扩增了长约1 070 bp的gD基因片段,将目的片段定向克隆到pET30a原核表达载体,转化BL21表达菌,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组gD蛋白.重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性.以该蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白为二抗,建立了检测猪伪狂犬病毒抗体的PPA-ELISA检测方法.该方法与其他7种常见猪病病毒(CSFV、PPV、PRRSV、JEV、PCV-2、PEDV、TGEV)的阳性血清不发生交叉反应;批内重复性试验的变异系数小于5％,批间重复性试验的变异系数小于10％;与IDEXX gD-ELISA试剂盒相比较,符合率、敏感性和特异性分别为92.0％、95.1％和88.1％.本研究建立的PRV gD-PPA-ELISA抗体检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为PRV的免疫猪群抗体监测、快速诊断和PRV流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法.
위건립일충쾌속적저위광견병독항체검측방법,본연구삼조이발표적PRV SA주기인조서렬,PCR확증료장약1 070 bp적gD기인편단,장목적편단정향극륭도pET30a원핵표체재체,전화BL21표체균,경IPTG유도후획득료이포함체형식표체적중조gD단백.중조단백순화후,경면역인적검측증명구유량호적항원성화특이성.이해단백작위포피항원,이랄근과양화물매표기포도구균A단백위이항,건립료검측저위광견병독항체적PPA-ELISA검측방법.해방법여기타7충상견저병병독(CSFV、PPV、PRRSV、JEV、PCV-2、PEDV、TGEV)적양성혈청불발생교차반응;비내중복성시험적변이계수소우5％,비간중복성시험적변이계수소우10％;여IDEXX gD-ELISA시제합상비교,부합솔、민감성화특이성분별위92.0％、95.1％화88.1％.본연구건립적PRV gD-PPA-ELISA항체검측방법구유량호적중복성、민감성화특이성,위PRV적면역저군항체감측、쾌속진단화PRV류행병학조사제공일충쾌속、간편적혈청학진단방법.