动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2014年
1期
32-35
,共4页
刘晓颖%姚志利%陈立志%廉士珍%夏小成%冯二凯
劉曉穎%姚誌利%陳立誌%廉士珍%夏小成%馮二凱
류효영%요지리%진립지%렴사진%하소성%풍이개
布鲁菌%外膜蛋白Bp26%乳糖%大肠埃希菌%表达
佈魯菌%外膜蛋白Bp26%乳糖%大腸埃希菌%錶達
포로균%외막단백Bp26%유당%대장애희균%표체
为了获得布鲁菌外膜蛋白Bp26活性重组蛋白,以布鲁菌M5株菌体DNA为模板,应用PCR方法扩增得到Bp26基因,将该基因片段克隆到载体pET28a中,转化到E.coli BL21(DE3)中,在不同条件下诱导表达,对获得的菌体细胞超声破碎,通过SDS-PAGE鉴定是否为可溶性表达.结果表明,pET28a-Bp26重组质粒构建成功;终浓度为1.0 mmol/L的IPTG在37℃下诱导,重组蛋白表达量最大;含乳糖成分的ZYM-5052培养基和终浓度为1.0 mmol/L的IPTG在相同条件下诱导表达蛋白,ZYM-5052培养基可以更好的获得可溶性表达蛋白,为进一步利用大肠埃希菌系统表达生产高活性重组Bp26蛋白提供了一定的参考依据.
為瞭穫得佈魯菌外膜蛋白Bp26活性重組蛋白,以佈魯菌M5株菌體DNA為模闆,應用PCR方法擴增得到Bp26基因,將該基因片段剋隆到載體pET28a中,轉化到E.coli BL21(DE3)中,在不同條件下誘導錶達,對穫得的菌體細胞超聲破碎,通過SDS-PAGE鑒定是否為可溶性錶達.結果錶明,pET28a-Bp26重組質粒構建成功;終濃度為1.0 mmol/L的IPTG在37℃下誘導,重組蛋白錶達量最大;含乳糖成分的ZYM-5052培養基和終濃度為1.0 mmol/L的IPTG在相同條件下誘導錶達蛋白,ZYM-5052培養基可以更好的穫得可溶性錶達蛋白,為進一步利用大腸埃希菌繫統錶達生產高活性重組Bp26蛋白提供瞭一定的參攷依據.
위료획득포로균외막단백Bp26활성중조단백,이포로균M5주균체DNA위모판,응용PCR방법확증득도Bp26기인,장해기인편단극륭도재체pET28a중,전화도E.coli BL21(DE3)중,재불동조건하유도표체,대획득적균체세포초성파쇄,통과SDS-PAGE감정시부위가용성표체.결과표명,pET28a-Bp26중조질립구건성공;종농도위1.0 mmol/L적IPTG재37℃하유도,중조단백표체량최대;함유당성분적ZYM-5052배양기화종농도위1.0 mmol/L적IPTG재상동조건하유도표체단백,ZYM-5052배양기가이경호적획득가용성표체단백,위진일보이용대장애희균계통표체생산고활성중조Bp26단백제공료일정적삼고의거.
