西部医学
西部醫學
서부의학
MEDICAL JOURNAL OF WEST CHINA
2014年
2期
142-145
,共4页
沈文燕%李冉%覃扬%杨文理%刘秋英%魏玲%俞小琴
瀋文燕%李冉%覃颺%楊文理%劉鞦英%魏玲%俞小琴
침문연%리염%담양%양문리%류추영%위령%유소금
vigilin%DsRed2荧光蛋白%重组载体%重组慢病毒
vigilin%DsRed2熒光蛋白%重組載體%重組慢病毒
vigilin%DsRed2형광단백%중조재체%중조만병독
Vigilin%DsRed2 fluorescent protein%Recombined lentiviral vector%Recombined lentivirus
目的 构建pCS-CG-DsRed2-vigilin慢病毒重组载体,以及包装pCS-CG-DsRed2-vigilin重组慢病毒.方法 用NheⅠ、NotⅠ将目的片段红色荧光蛋白基因DsRed2从pDsRed2-N1中切下,连入pcDNA3.1(-)上,再用Kpn1从pcDNA3.1(-)-DsRed2中切下DsRed2片段插入pCS-CG-vigilin中.用相应的内切酶鉴定,阳性克隆送测序鉴定.采用三质粒系统包装慢病毒并分别感染HEK293T和HepG2细胞.结果 电泳显示,构建的pCS-CG-DsRed2-vigilin用KpnⅠ和SacⅡ分别单酶切切下800bp和600bp的插入片段,阳性克隆质粒测序结果与pDsRed2-N1中DsRed2序列一致;HEK293T和HepG2细胞感染后均能观察到较强的红色荧光.结论 带有红色荧光基因的pCS-CG-DsRed2-vigilin重组载体构建成功;成功包装出带红色荧光标签的vigilin重组慢病毒,且该病毒具有较高的感染效率.
目的 構建pCS-CG-DsRed2-vigilin慢病毒重組載體,以及包裝pCS-CG-DsRed2-vigilin重組慢病毒.方法 用NheⅠ、NotⅠ將目的片段紅色熒光蛋白基因DsRed2從pDsRed2-N1中切下,連入pcDNA3.1(-)上,再用Kpn1從pcDNA3.1(-)-DsRed2中切下DsRed2片段插入pCS-CG-vigilin中.用相應的內切酶鑒定,暘性剋隆送測序鑒定.採用三質粒繫統包裝慢病毒併分彆感染HEK293T和HepG2細胞.結果 電泳顯示,構建的pCS-CG-DsRed2-vigilin用KpnⅠ和SacⅡ分彆單酶切切下800bp和600bp的插入片段,暘性剋隆質粒測序結果與pDsRed2-N1中DsRed2序列一緻;HEK293T和HepG2細胞感染後均能觀察到較彊的紅色熒光.結論 帶有紅色熒光基因的pCS-CG-DsRed2-vigilin重組載體構建成功;成功包裝齣帶紅色熒光標籤的vigilin重組慢病毒,且該病毒具有較高的感染效率.
목적 구건pCS-CG-DsRed2-vigilin만병독중조재체,이급포장pCS-CG-DsRed2-vigilin중조만병독.방법 용NheⅠ、NotⅠ장목적편단홍색형광단백기인DsRed2종pDsRed2-N1중절하,련입pcDNA3.1(-)상,재용Kpn1종pcDNA3.1(-)-DsRed2중절하DsRed2편단삽입pCS-CG-vigilin중.용상응적내절매감정,양성극륭송측서감정.채용삼질립계통포장만병독병분별감염HEK293T화HepG2세포.결과 전영현시,구건적pCS-CG-DsRed2-vigilin용KpnⅠ화SacⅡ분별단매절절하800bp화600bp적삽입편단,양성극륭질립측서결과여pDsRed2-N1중DsRed2서렬일치;HEK293T화HepG2세포감염후균능관찰도교강적홍색형광.결론 대유홍색형광기인적pCS-CG-DsRed2-vigilin중조재체구건성공;성공포장출대홍색형광표첨적vigilin중조만병독,차해병독구유교고적감염효솔.
