感染、炎症、修复
感染、炎癥、脩複
감염、염증、수복
INFECTION， INFLAMMATION， REPAIR
2013年
4期
225-227,前插2
,共4页
谭志军%陈艳%赵洪良%赵换军%孙同柱%马奎%张翠萍%付小兵
譚誌軍%陳豔%趙洪良%趙換軍%孫同柱%馬奎%張翠萍%付小兵
담지군%진염%조홍량%조환군%손동주%마규%장취평%부소병
胰酶-EDTA汗腺%分离%纯化%成纤维细胞
胰酶-EDTA汗腺%分離%純化%成纖維細胞
이매-EDTA한선%분리%순화%성섬유세포
目的:探讨胰酶-EDTA差速消化法纯化原代培养的汗腺细胞的效果.方法:取新鲜的腹部手术患者腹部皮肤,D-Hanks液浸洗去除皮肤中的血液,剪成1 mm×1 mm大小的皮粒,将剪碎的皮粒放入装有5 ml (2 mg/ml) 的Ⅱ型胶原酶的培养皿中,置于37 ℃、5%CO2孵箱中消化8~12 h,倒置相差显微镜直视下吸取游离的汗腺,用汗腺培养基培养5~7 d,观察细胞形态和生长状况,加入胰酶-EDTA混合溶液2 ml(胰蛋白酶0.25,EDTA 0.53 mol/L)消化3 min,成纤维细胞收缩变圆后立即加入胎牛血清5 ml终止消化,吸弃消化液,D-Hanks冲洗2~3次,加入5 ml含10%胎牛血清DMEM培养液继续培养.镜下观察成纤维细胞去除效果,并对纯化后的细胞进行免疫细胞化学鉴定.结果:汗腺分离培养5~7 d后,汗腺细胞呈铺路石样生长,并且汗腺细胞周围生长有大量的成纤维细胞;用胰酶-EDTA消化3 min后,细胞计数显示约有95%以上的成纤维细胞被去除;免疫细胞化学鉴定结果显示纯化后的细胞CEA和CK8染色阳性,而波形蛋白和成纤维细胞特异性蛋白染色阴性.结论:胰酶-EDTA差速消化法能够简单、快速、高效地纯化汗腺细胞.
目的:探討胰酶-EDTA差速消化法純化原代培養的汗腺細胞的效果.方法:取新鮮的腹部手術患者腹部皮膚,D-Hanks液浸洗去除皮膚中的血液,剪成1 mm×1 mm大小的皮粒,將剪碎的皮粒放入裝有5 ml (2 mg/ml) 的Ⅱ型膠原酶的培養皿中,置于37 ℃、5%CO2孵箱中消化8~12 h,倒置相差顯微鏡直視下吸取遊離的汗腺,用汗腺培養基培養5~7 d,觀察細胞形態和生長狀況,加入胰酶-EDTA混閤溶液2 ml(胰蛋白酶0.25,EDTA 0.53 mol/L)消化3 min,成纖維細胞收縮變圓後立即加入胎牛血清5 ml終止消化,吸棄消化液,D-Hanks遲洗2~3次,加入5 ml含10%胎牛血清DMEM培養液繼續培養.鏡下觀察成纖維細胞去除效果,併對純化後的細胞進行免疫細胞化學鑒定.結果:汗腺分離培養5~7 d後,汗腺細胞呈鋪路石樣生長,併且汗腺細胞週圍生長有大量的成纖維細胞;用胰酶-EDTA消化3 min後,細胞計數顯示約有95%以上的成纖維細胞被去除;免疫細胞化學鑒定結果顯示純化後的細胞CEA和CK8染色暘性,而波形蛋白和成纖維細胞特異性蛋白染色陰性.結論:胰酶-EDTA差速消化法能夠簡單、快速、高效地純化汗腺細胞.
목적:탐토이매-EDTA차속소화법순화원대배양적한선세포적효과.방법:취신선적복부수술환자복부피부,D-Hanks액침세거제피부중적혈액,전성1 mm×1 mm대소적피립,장전쇄적피립방입장유5 ml (2 mg/ml) 적Ⅱ형효원매적배양명중,치우37 ℃、5%CO2부상중소화8~12 h,도치상차현미경직시하흡취유리적한선,용한선배양기배양5~7 d,관찰세포형태화생장상황,가입이매-EDTA혼합용액2 ml(이단백매0.25,EDTA 0.53 mol/L)소화3 min,성섬유세포수축변원후립즉가입태우혈청5 ml종지소화,흡기소화액,D-Hanks충세2~3차,가입5 ml함10%태우혈청DMEM배양액계속배양.경하관찰성섬유세포거제효과,병대순화후적세포진행면역세포화학감정.결과:한선분리배양5~7 d후,한선세포정포로석양생장,병차한선세포주위생장유대량적성섬유세포;용이매-EDTA소화3 min후,세포계수현시약유95%이상적성섬유세포피거제;면역세포화학감정결과현시순화후적세포CEA화CK8염색양성,이파형단백화성섬유세포특이성단백염색음성.결론:이매-EDTA차속소화법능구간단、쾌속、고효지순화한선세포.
