中国临床神经科学
中國臨床神經科學
중국림상신경과학
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL NEUROSCIENCES
2014年
1期
20-25
,共6页
胚胎干细胞%快速聚集无血清悬浮培养法%神经分化%大脑%皮质椎体神经元
胚胎榦細胞%快速聚集無血清懸浮培養法%神經分化%大腦%皮質椎體神經元
배태간세포%쾌속취집무혈청현부배양법%신경분화%대뇌%피질추체신경원
embryonic stem cell%serum-free culture of embryoid body-like aggregates with quick reaggregation%neural differentiation%brain%cortex pyramidal neuron
目的 以往的研究多集中于胚胎干细胞(ESCs)经外部因素的诱导而转化为神经元,本研究拟探讨一种新的诱导ESCs定向分化方法——快速聚集无血清悬浮培养法(SFEBq).方法 BALB/c小鼠囊胚内细胞团(ICM)消化成单个细胞,培养传代并鉴定后,应用改进的SFEBq诱导小鼠胚胎干细胞(mESCs)向神经细胞选择分化,并应用免疫荧光染色和流式细胞仪检测Bfl+和Emxl+神经前体细胞的比例,RT-PCR检测不同分化阶段的细胞标志基因表达.结果 ①分离培养得到的mESCs生长状态良好;②SFEBq使mESCs自主发生神经细胞,无需外部诱因,细胞种植量为3 000个/孔时,细胞Bfl+和Emxl+相对表达量最高;③mESCs按照一个先神经元-后胶质细胞的顺序有效分化,与体内胚胎神经组织发育先后顺序一致,且诱导的神经前体细胞可分化为皮质椎体神经元.结论 建立了一种改良的高效ESCs诱导转化的神经元的SFEBq.
目的 以往的研究多集中于胚胎榦細胞(ESCs)經外部因素的誘導而轉化為神經元,本研究擬探討一種新的誘導ESCs定嚮分化方法——快速聚集無血清懸浮培養法(SFEBq).方法 BALB/c小鼠囊胚內細胞糰(ICM)消化成單箇細胞,培養傳代併鑒定後,應用改進的SFEBq誘導小鼠胚胎榦細胞(mESCs)嚮神經細胞選擇分化,併應用免疫熒光染色和流式細胞儀檢測Bfl+和Emxl+神經前體細胞的比例,RT-PCR檢測不同分化階段的細胞標誌基因錶達.結果 ①分離培養得到的mESCs生長狀態良好;②SFEBq使mESCs自主髮生神經細胞,無需外部誘因,細胞種植量為3 000箇/孔時,細胞Bfl+和Emxl+相對錶達量最高;③mESCs按照一箇先神經元-後膠質細胞的順序有效分化,與體內胚胎神經組織髮育先後順序一緻,且誘導的神經前體細胞可分化為皮質椎體神經元.結論 建立瞭一種改良的高效ESCs誘導轉化的神經元的SFEBq.
목적 이왕적연구다집중우배태간세포(ESCs)경외부인소적유도이전화위신경원,본연구의탐토일충신적유도ESCs정향분화방법——쾌속취집무혈청현부배양법(SFEBq).방법 BALB/c소서낭배내세포단(ICM)소화성단개세포,배양전대병감정후,응용개진적SFEBq유도소서배태간세포(mESCs)향신경세포선택분화,병응용면역형광염색화류식세포의검측Bfl+화Emxl+신경전체세포적비례,RT-PCR검측불동분화계단적세포표지기인표체.결과 ①분리배양득도적mESCs생장상태량호;②SFEBq사mESCs자주발생신경세포,무수외부유인,세포충식량위3 000개/공시,세포Bfl+화Emxl+상대표체량최고;③mESCs안조일개선신경원-후효질세포적순서유효분화,여체내배태신경조직발육선후순서일치,차유도적신경전체세포가분화위피질추체신경원.결론 건립료일충개량적고효ESCs유도전화적신경원적SFEBq.
