山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2014年
1期
29-31
,共3页
赵莉莉%汪军梅%刘新宇%赵郁%毛用敏%解用虹
趙莉莉%汪軍梅%劉新宇%趙鬱%毛用敏%解用虹
조리리%왕군매%류신우%조욱%모용민%해용홍
载脂蛋白CⅡ%脂蛋白脂肪酶%基因工程%高甘油三酯血症%融合蛋白
載脂蛋白CⅡ%脂蛋白脂肪酶%基因工程%高甘油三酯血癥%融閤蛋白
재지단백CⅡ%지단백지방매%기인공정%고감유삼지혈증%융합단백
目的 构建人载脂蛋白CⅡ(ApoCⅡ)的原核表达载体,表达融合蛋白GST-hApoCⅡ.方法 采用限制性内切酶BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切pUC18/hApoCⅡ获得ApoCⅡ成熟肽基因片段,并与相同酶切处理的表达载体pGEX-3X连接构建重组质粒.重组质粒经酶切鉴定、测序验证后转化感受态E.coli DH5α,IPTG诱导表达,优化表达条件,表达产物经SDS-PAGE电泳分析鉴定.选取最佳条件诱导表达,亲和层系法纯化融合蛋白,采用Western blot鉴定.结果 重组质粒经酶切和测序后证实目的基因已连接入表达载体,SDS-PAGE检测到35 kD的目的蛋白条带,优化和纯化后经Western blot证实蛋白质产物为融合蛋白GST-hApoCⅡ.结论 本方法成功表达融合蛋白GST-hApoCⅡ,此为ApoCⅡ结构及其作用机理研究及制备ApoCⅡ抗体等提供了便利条件.
目的 構建人載脂蛋白CⅡ(ApoCⅡ)的原覈錶達載體,錶達融閤蛋白GST-hApoCⅡ.方法 採用限製性內切酶BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ雙酶切pUC18/hApoCⅡ穫得ApoCⅡ成熟肽基因片段,併與相同酶切處理的錶達載體pGEX-3X連接構建重組質粒.重組質粒經酶切鑒定、測序驗證後轉化感受態E.coli DH5α,IPTG誘導錶達,優化錶達條件,錶達產物經SDS-PAGE電泳分析鑒定.選取最佳條件誘導錶達,親和層繫法純化融閤蛋白,採用Western blot鑒定.結果 重組質粒經酶切和測序後證實目的基因已連接入錶達載體,SDS-PAGE檢測到35 kD的目的蛋白條帶,優化和純化後經Western blot證實蛋白質產物為融閤蛋白GST-hApoCⅡ.結論 本方法成功錶達融閤蛋白GST-hApoCⅡ,此為ApoCⅡ結構及其作用機理研究及製備ApoCⅡ抗體等提供瞭便利條件.
목적 구건인재지단백CⅡ(ApoCⅡ)적원핵표체재체,표체융합단백GST-hApoCⅡ.방법 채용한제성내절매BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ쌍매절pUC18/hApoCⅡ획득ApoCⅡ성숙태기인편단,병여상동매절처리적표체재체pGEX-3X련접구건중조질립.중조질립경매절감정、측서험증후전화감수태E.coli DH5α,IPTG유도표체,우화표체조건,표체산물경SDS-PAGE전영분석감정.선취최가조건유도표체,친화층계법순화융합단백,채용Western blot감정.결과 중조질립경매절화측서후증실목적기인이련접입표체재체,SDS-PAGE검측도35 kD적목적단백조대,우화화순화후경Western blot증실단백질산물위융합단백GST-hApoCⅡ.결론 본방법성공표체융합단백GST-hApoCⅡ,차위ApoCⅡ결구급기작용궤리연구급제비ApoCⅡ항체등제공료편리조건.
