CAJ | 학술논문

[目的]通过制备STAT-1α多克隆抗体,为进一步研究STAT-1α蛋白的功能特性及探索STAT-1α与猪瘟病毒间的相互作用机制奠定基础.[方法]利用RT-PCR从猪肾PK-15细胞中克隆出STAT-1α基因保守片段,与pET-32a(+)构建原核表达重组质粒,转化原核宿主菌(Rosetta),进行IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经纯化和复性浓缩后,免疫小鼠制备STAT-1α多克隆抗体.[结果]STAT-1α基因能与原核表达载体pET-32a(+)构建原核表达重组质粒pET-STAT-1o,转化大肠杆菌Rosetta后的最佳体外诱导条件是IPTG 0.5 mmol/L、诱导时间6h,其重组蛋白主要以包涵体的形式表达.STAT-1α多克隆抗体具有高效特异性,与真核细胞PK-15细胞作用后,在PK-15细胞内能检测到STAT-1α蛋白表达,可观察到大部分细胞胞浆内有绿色荧光,但胞核内几乎无荧光,即STAT-1α主要定位在正常PK-15细胞的细胞浆内表达.[结论]制备获得的猪STAT-1 α多克隆抗体特异性好,既能与原核细胞大肠杆菌(Rosetta)表达的STAT-1α反应,又能与真核细胞PK-15的STAT-1α发生反应.
[목적]통과제비STAT-1α다극륭항체,위진일보연구STAT-1α단백적공능특성급탐색STAT-1α여저온병독간적상호작용궤제전정기출.[방법]이용RT-PCR종저신PK-15세포중극륭출STAT-1α기인보수편단,여pET-32a(+)구건원핵표체중조질립,전화원핵숙주균(Rosetta),진행IPTG유도표체,표체적중조단백경순화화복성농축후,면역소서제비STAT-1α다극륭항체.[결과]STAT-1α기인능여원핵표체재체pET-32a(+)구건원핵표체중조질립pET-STAT-1o,전화대장간균Rosetta후적최가체외유도조건시IPTG 0.5 mmol/L、유도시간6h,기중조단백주요이포함체적형식표체.STAT-1α다극륭항체구유고효특이성,여진핵세포PK-15세포작용후,재PK-15세포내능검측도STAT-1α단백표체,가관찰도대부분세포포장내유록색형광,단포핵내궤호무형광,즉STAT-1α주요정위재정상PK-15세포적세포장내표체.[결론]제비획득적저STAT-1 α다극륭항체특이성호,기능여원핵세포대장간균(Rosetta)표체적STAT-1α반응,우능여진핵세포PK-15적STAT-1α발생반응.