山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2014年
2期
1-4
,共4页
赵曼茵%李咏梅%岳天孚%杜雪%黑凯文%邱依然%杨柏财
趙曼茵%李詠梅%嶽天孚%杜雪%黑凱文%邱依然%楊柏財
조만인%리영매%악천부%두설%흑개문%구의연%양백재
卵巢癌%Pim-3%丝/苏氨酸激酶%慢病毒载体
卵巢癌%Pim-3%絲/囌氨痠激酶%慢病毒載體
란소암%Pim-3%사/소안산격매%만병독재체
ovarian carcinoma%Pim-3%serine-threonine kinase%lentiviral vector
目的 构建Pim-3慢病毒质粒,鉴定其在卵巢癌SKOV3细胞中基因及蛋白水平的表达.方法 RT-PCR法提取Pim-3 cDNA,经T-A克隆及双酶切将其与慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP重组;酶切鉴定及基因测序后,将阳性重组质粒导入病毒包装细胞293T中;收集病毒上清液转染SKOV3细胞,荧光显微镜下观察转染情况,应用RT-PCR及Western blot法分别检测Pim-3 mRNA及其蛋白.结果 RT-PCR法获得Pim-3基因,重组质粒酶切后片段大小及基因测序结果显示pCDH/Pim-3重组质粒构建成功.将感染重组质粒及空载体的293T细胞生产的病毒上清分别感染SKOV3细胞,感染重组质粒的SKOV3细胞中Pim-3 mRNA及蛋白表达水平均高于空载体细胞.结论 成功构建了pCDH/Pim-3重组慢病毒质粒,建立了Pim-3高表达SKOV3瞬转细胞模型,为探讨Pim-3在卵巢癌发生、发展中的作用及机制奠定实验基础.
目的 構建Pim-3慢病毒質粒,鑒定其在卵巢癌SKOV3細胞中基因及蛋白水平的錶達.方法 RT-PCR法提取Pim-3 cDNA,經T-A剋隆及雙酶切將其與慢病毒錶達載體pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP重組;酶切鑒定及基因測序後,將暘性重組質粒導入病毒包裝細胞293T中;收集病毒上清液轉染SKOV3細胞,熒光顯微鏡下觀察轉染情況,應用RT-PCR及Western blot法分彆檢測Pim-3 mRNA及其蛋白.結果 RT-PCR法穫得Pim-3基因,重組質粒酶切後片段大小及基因測序結果顯示pCDH/Pim-3重組質粒構建成功.將感染重組質粒及空載體的293T細胞生產的病毒上清分彆感染SKOV3細胞,感染重組質粒的SKOV3細胞中Pim-3 mRNA及蛋白錶達水平均高于空載體細胞.結論 成功構建瞭pCDH/Pim-3重組慢病毒質粒,建立瞭Pim-3高錶達SKOV3瞬轉細胞模型,為探討Pim-3在卵巢癌髮生、髮展中的作用及機製奠定實驗基礎.
목적 구건Pim-3만병독질립,감정기재란소암SKOV3세포중기인급단백수평적표체.방법 RT-PCR법제취Pim-3 cDNA,경T-A극륭급쌍매절장기여만병독표체재체pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP중조;매절감정급기인측서후,장양성중조질립도입병독포장세포293T중;수집병독상청액전염SKOV3세포,형광현미경하관찰전염정황,응용RT-PCR급Western blot법분별검측Pim-3 mRNA급기단백.결과 RT-PCR법획득Pim-3기인,중조질립매절후편단대소급기인측서결과현시pCDH/Pim-3중조질립구건성공.장감염중조질립급공재체적293T세포생산적병독상청분별감염SKOV3세포,감염중조질립적SKOV3세포중Pim-3 mRNA급단백표체수평균고우공재체세포.결론 성공구건료pCDH/Pim-3중조만병독질립,건립료Pim-3고표체SKOV3순전세포모형,위탐토Pim-3재란소암발생、발전중적작용급궤제전정실험기출.
